【摘 要】
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本文以18味花类中药为研究体系,筛选有效的酪氨酸酶抑制剂,研究酪氨酸酶抑制剂蔷薇花的超声波辅助提取工艺和大孔树脂分离工艺,最后探讨了蔷薇花抑制酪氨酸酶双酚酶的抑制机制。
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本文以18味花类中药为研究体系,筛选有效的酪氨酸酶抑制剂,研究酪氨酸酶抑制剂蔷薇花的超声波辅助提取工艺和大孔树脂分离工艺,最后探讨了蔷薇花抑制酪氨酸酶双酚酶的抑制机制。 以DPPH自由基清除率和酪氨酸酶单酚酶及双酚酶抑制率为指标,用50%的乙醇超声提取18味花类中药,结果显示蔷薇花提取液抑制酪氨酸酶单酚酶和双酚酶效果最佳,抑制率分别为72.23%和88.07%,其清除DPPH自由基的效果也相对显著,综合考虑选取蔷薇花为最佳酪氨酸酶抑制剂。 采用单因素实验和正交实验优化超声波提取蔷薇花的提取工艺,实验结果显示最佳提取工艺为:用50%乙醇-水溶液为提取溶剂,1∶20的料液比,在20℃条件下超声提取10 min。对于酪氨酸酶抑制率的影响大小:乙醇浓度>提取时间>提取温度>提取料液比。其中,乙醇浓度为显著因素。 以静态吸附率和静态解吸率为指标,在4种不同极性的HZ树脂中选择适用于分离蔷薇花的大孔树脂,结果显示HZ-816为最佳树脂。通过动态吸附和洗脱实验,确定分离蔷薇花的最佳提取工艺:上样液浓度为5mg/mL,上样体积300mL,洗脱剂浓度为75%的乙醇,洗脱剂体积200mL。树脂洗脱物抑制酪氨酸酶双酚酶的IC50值为1.381mg/mL。1g大孔树脂洗脱物中含有25.9mg总黄酮。 通过Lineweaver-Burk双倒数图判定蔷薇花大孔树脂洗脱物对于酪氨酸酶双酚酶的抑制类型为混合型抑制,蔷薇花大孔树脂物对于游离酶的抑制常数KI为4.17mg/mL,对于酶和底物的络合物的抑制常数KIs为10.39mg/mL。 综上,蔷薇花是较强的酪氨酸酶抑制剂,可以考虑将其用于美白化妆品的开发研究中去。
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