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目的:探讨miR-155-5p在肾母细胞瘤中的表达及其靶向调控IGF2通过PI3K信号通路对肾母细胞瘤细胞生物学行为的影响及作用机制。方法:1.临床样本分析:(1)分别利用miRNA芯片技术及转录组测序技术检测4例肾母细胞瘤患者血液样本中miRNA的表达以及8例患儿肿瘤和对应瘤旁组织中mRNA的表达;(2)收集87例肾母细胞瘤患儿肿瘤组织及其对应的瘤旁组织,采用RT-qPCR验证miR-155-5p及IGF2表达差异,利用WB和免疫组化实验检测IGF2、PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达水平;(3)结合临床资料分析miR-155-5p和IGF2表达量与患者临床病理特征的相关性。2.生物信息学分析:(1)下载GEO和TARGET数据库中肾母细胞瘤组织mRNA及miRNA芯片数据,利用R语言筛选差异mRNA和miRNA;(2)利用TargetScan、miRWalk、mirBridge、miRDB、miRNAMap、PicTar等在线预测网站预测差异miRNAs的靶向mRNA基因;(3)KEGG富集差异miRNAs靶基因相关的信号通路及疾病类型,GO注释和KEGG富集差异mRNAs的功能及参与的信号通路。3.细胞学实验:(1)应用RT-qPCR检测肾母细胞瘤细胞系G401、SK-NEP-1及正常肾小管上皮细胞系HK2中miR-155-5p表达;(2)在肾母细胞瘤细胞系中,运用脂质体转染技术过表达/抑制miR-155-5p以及沉默IGF2表达,通过RT-qPCR检测miR-155-5p和IGF2的表达,Western?blot检测IGF2、PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达;(3)采用CCK8、Transwell、划痕实验和流式细胞术分别检测miR-155-5p和IGF2对肾母细胞瘤细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响;(4)双荧光素酶报告实验检测miR-155-5p与IGF2的靶向调控关系。结果:1.与正常对照组相比,miR-155-5p在肾母细胞瘤患者血液、未经放化疗的肿瘤组织及细胞系中表达显著降低(p<0.001),而在化疗后组织中的表达显著增高(p<0.001);IGF2、PI3K、AKT和mTOR在肾母细胞瘤组织中的表达显著增高(p<0.001);且miR-155-5p和IGF2表达量与临床分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。2.生物信息学技术检测发现miR-155-5p和IGF2在肾母细胞瘤中的表达与组织实验一致,且在线网站预测IGF2为miR-155-5p的靶向基因。差异miRNAs的靶基因富集的多条信号通路与肿瘤进展相关,包括PI3K-AKT通路、Hippo通路、mTOR通路及胰岛素信号通路等;而富集的疾病主要包含肿瘤、先天性疾病以及神经系统等。差异mRNAs的功能主要富集在细胞或细胞器合成和代谢过程、细胞连接催化活性、RNA定位/连接/转录、DNA复制等;而主要富集的信号通路是p53信号通路、mRNA监视通路、Hedgehog信号通路等。3.双荧光素酶实验证实miR-155-5p可靶向调控IGF2表达;过表达miR-155-5p能抑制肾母细胞瘤细胞IGF2、PI3K、AKT及mTOR的表达活性,从而抑制细胞增殖、侵袭及迁移能力,并诱导肿瘤细胞凋亡;反之,抑制miR-155-5p表达能够促进细胞增殖、侵袭及迁移能力,并抑制肿瘤细胞凋亡;沉默IGF2后使miR-155-5p表达增高,而PI3K、AKT和mTOR表达均降低,进而减弱肾母细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移能力,并促进细胞凋亡。结论:1.miR-155-5p在肾母细胞瘤中呈低表达,IGF2、PI3K、AKT、mTOR呈高表达,且miR-155-5p和IGF2均与肿瘤的临床分期和淋巴结转移相关。2.肾母细胞瘤中差异miRNAs的靶基因主要富集在PI3K-AKT信号通路、mTOR通路等,而差异mRNAs主要富集于RNA代谢、p53信号通路、细胞周期等。3.miR-155-5p可直接结合IGF2并能通过下调IGF2的表达,抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路,从而抑制肾母细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移,并促进凋亡。4.IGF2可反向调控miR-155-5p表达,促进PI3K-AKT-mTOR信号通路,进而促进肾母细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。5.miR-155-5p表达水平与是否化疗成正相关,有望成为肾母细胞瘤诊断、治疗和预后评估的一个新的潜在标志物。