多环芳烃类化合物（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs）是由多个苯环以不同的排列方式组成的有机化合物,广泛存在于环境中。人类和动物接触PAHs会导致多种不利影响,包括致畸性、致癌性、致突变性、遗传毒性等。目前水产品中PAHs的残留在全球范围内较为普遍,其在水产品中的积累不仅会对水产品的质量造成影响,而且会通过生物的体内积累对人类健康造成广泛又持久的严重危害。因此,对于水产品中PAHs的残留监测显得尤为重要。PAHs的检测多为仪器分析法,虽然该方法的灵敏度较高,但检测成本高、处理步骤复杂耗时且不能进行现场检测。相对于仪器分析法,简单快速、高灵敏度、高通量以及价格低廉的免疫分析法是当今快速检测方法的主流技术,非常适合PAHs残留的筛选分析和现场检测。目前有关PAHs污染物残留的免疫分析主要集中在大气、土壤、水体样品等方面,对水产品中PAHs残留的免疫分析方法研究较少。因此,建立水产品中PAHs残留的免疫分析方法具有重要的应用价值。本研究以芘丁酸（PBA）为半抗原,合成了不同偶联比的完全抗原,并制备了一株能够识别芘（PYR）和苯并[a]芘（BaP）的单克隆抗体。基于此抗体,建立了相应的酶联免疫检测方法,并应用于鱼、虾、蟹中PYR和BaP的残留检测。内容如下:1.以PBA为半抗原,通过碳二亚胺法（EDC）与BSA、OVA以不同的投料比相偶联,成功制备了不同偶联比的完全抗原。免疫原PBA-BSA和包被原PBA-OVA的偶联比分别为8.1（A1）、12.8（A2）、18.3（A3）、9.4（B1）、11.7（B2）、19.2（B3）。2.将不同偶联比的免疫原按照不同剂量免疫小鼠,用不同偶联比的包被原对小鼠血清的效价及抑制情况进行监测。结果表明,以PBA-BSA-A3作免疫原,50μg/只的剂量免疫小鼠,以PBA-OVA-B3作为包被原对小鼠血清进行监测时,其血清效价较高且抑制率较好。3.通过多次细胞融合及筛选,最终获得了一株能同时识别PYR和BaP的杂交瘤细胞株4D6,该抗体的亚型为Ig G1。对影响ELISA灵敏度的条件进行摸索。结果显示,以PBA-OVA-B3作为包被原,2μg/m L的浓度过夜包被、4D6抗体稀释度为1:20000、二抗工作浓度为1:6000、20%DMF作为竞争药物的稀释溶液时,灵敏度最高。以PYR为竞争药物,建立标曲。其回归方程为:y=-54.756x+79.143,R~2=0.9956,IC50值为3.73±0.43 ng/m L（n=5）,线性范围为1-16 ng/m L。该抗体对PYR（100%）和BaP（38%）的亲和力较高。4.在ELISA方法的应用中,PYR和BaP在鱼、虾、蟹样品中的检测限（LOD）分别为0.43-0.54μg/kg和0.92-0.98μg/kg,定量限（LOQ）分别为0.56-0.71μg/kg和1.12-1.22μg/kg。5.按照1×LOQ,2×LOQ,4×LOQ向鱼、虾、蟹空白样品中添加PYR和BaP的标准溶液。结果表明,PYR和BaP在鱼、虾、蟹中的添加回收率分别为81.5%-101.9%和84.9%-94.0%。在方法的对比考核中,本研究建立的ic-ELISA与HPLC-FLD的结果较一致,说明本研究建立的ic-ELISA方法可以作为实际样品中PYR和BaP残留检测的可靠工具。6.对于稳定性研究,在4℃条件下,PYR标准溶液至少能保存一年。在37℃加速条件下,PBA-OVA包被原能保存8 d,相当于4℃保存12个月;4D6抗体能稳定保存6 d以上,相当于4℃保存9个月。本研究通过半抗原的选择和完全抗原合成的优化,经过多次细胞融合及克隆化筛选,获得了灵敏度较高且能同时识别PYR和BaP的单克隆抗体。由此建立的ELISA方法可应用于虾、蟹、鱼中的PYR和BaP残留检测。该方法弥补了水产品中PYR和BaP化合物ELISA检测的空白,为水产品中PYR和BaP残留检测试剂盒的研制与应用奠定了基础,在保障水产品质量安全方面具有较高的应用价值。