猪传染性胸膜肺炎（PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起的高度接触性呼吸道疾病,每年给我国的畜牧产业带来巨大的经济损失。本试验设计用APP血清3型菌S1421株为材料,用氨苄青霉素抗性基因替换其毒力蛋白的激活基因ApxⅢC,对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅢC基因缺失重组转移载体的构建进行了研究,内容如下:1、APP基因缺失apxⅢC^-/Amp^r+重组转移载体的左、右同源臂及氨苄抗性基因的克隆与鉴定根据NCBI发表的APP血清3型的全基因组序列,参照ApxⅢC上游和下游的部分基因,分别设计引物扩增1553 bp和1537 bp的序列作为重组转移载体的左右同源臂。将左同源臂（包含部分C基因）PCR扩增后直接TA克隆到pBS-TⅡ上;筛选获得的正向克隆命名为pBSLⅡ。将右同源臂TA克隆到pMP-19 simple载体上,命名为pMD-Ra。左、右同源臂经测序后与NCBI上公布的序列同源性均达到了99.99%。根据pMD-19 simple载体的全基因序列,设计了一对引物扩增氨苄抗性基因,大小为861 bp。将其TA克隆到pMD-19 simple载体上,鉴定正确后命名为pMD-Amp。用HindⅢ和XbaⅠ分别双酶切卡那抗性的pVAX1质粒载体和pBSL-Amp,前者回收大片段后者回收小片段,将此二片段定向连接后转化入大肠杆菌中,复壮后涂布于含有氨苄青霉素和卡那霉素的LB/X-gal平板中,挑选白斑抽取质粒进行酶切鉴定。HindⅢ和XbaⅠ双酶切后得到一条3000 bp和近2400 bp的条带。用引物Amp（U）和Amp（L）扩增氨苄抗性基因,得到一条近900 bp的条带,与预期结果相符。证明氨苄抗性基因可用ApxⅢC基因的启动子启动表达。氨苄抗性基因经测序与宝生物公布的序列同源性达到了99.9%。2、APP基因缺失apxⅢC^-/Amp^r+重组转移载体的构建用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切pBSLⅡ和pMD-Amp,分别胶回收大片段和小片段;连接后得到中间载体pBSL-Amp。用XbaⅠ和SacⅡ双酶切载体pBSL-Amp和pMD-Ra,分别回收大片段和小片段;连接后得到重组转移载体pBSL-Amp-R。载体经酶切和PCR鉴定正确。