目的：糖尿病肾病(DN)是一种严重的微血管并发症，是糖尿病(DM)危害性最大的慢性并发症之一，也是DM致死致残的重要原因。近期研究表明，过氧亚硝基阴离子(ONOO)可能在DN的发病机制中起重要作用。 ONOO在体内主要由NO和O<,2> 反应生成。NO是一小分子自由基，具有广泛的生物活性，在生物体内由NO合酶(NOS)催化生成。NOS主要有三种亚型：神经型NOS(nNOS)、诱导型NOS(iNOS)、内皮型NOS(eNOS)。近期研究表明，DM时iNOS被激活，产生大量的NO，与增多的O<,2> 可快速反应生成ONOO。ONOO 及其衍生物的氧化能力比H<,2>O<,2>大2000倍，是目前已知氧化作用最强的一类物质，可对生物膜、蛋白、酶、DNA造成氧化硝基化损伤。 线粒体作为氧化应激的重要部位而倍受关注。DM状态下，线粒体的氧化磷酸化被认为是O<,2>的主要来源之一。线粒体内过量产生的O<,2>可与 NO 迅速反应，使线粒体成为ONOO的重要来源。ONOO硝基化蛋白质生成的硝基酪氨酸(NT)作为ONOO生成的标志物，也是其引起蛋白质硝基化损伤的重要指标。目前已从DM实验大鼠及DN病人肾脏组织中检测到NT的生成增多，但DM时肾线粒体NT变化还未见报道。 为此，本研究通过检测DM大鼠肾脏线粒体NT变化揭示ONOO对肾线粒体产生的氧化硝基化损伤，进一步探讨ONOO在DN发生发展中的作用，并积极应用养阴活血方药(NYPBR)和氨基胍(AG)进行对比干预防治，进一步探索DN发病机理和有效的防治手段。 方法： 1.动物分组与取材4月龄健康雄性SD大鼠42只，随机分为2组，(1)正常对照组(NC组)(10只)；(2)造模组(32只)：腹腔注射STZ溶液制备DM模型。造膜成功后，成模大鼠随机分为：糖尿病模型组(DM组)(12只)，养阴活血方药组(NYPBR组)(10只)，氨基胍组(AG组)(10只)。NYPBR组按人与动物间体表面积折算的等效剂量比值灌喂给药；AG组用稀释成3‰的AG溶液灌养。20-25℃室温下喂养10周后，收集各组大鼠24h尿液，记录尿量，称量体重，检测血糖。股动脉放血，收集血标本。分离左肾一部分肾皮质立即置液氮中保存，用于提取肾组织RNA及检测其他生化指标，另取一部分肾皮质切成1 mm<3>小块，迅速置于戊二醛固定液中，备电镜观察，再取一部分置于多聚甲醛溶液中固定，用于病理形态学研究，剩余肾组织全部用于线粒体提取。 2.光镜及透射电镜下观察肾组织形态学变化。 3.免疫组织化学检测肾组织NT的生成。 4.测定肾组织中SOD、MDA：SOD采用黄嘌呤氧化酶法；MDA采用硫代巴比妥酸法测定。 5.测定血清TG、TC：用化学比色法(均按试剂盒说明操作)。 6.肾功能相关指标的测定：24小时尿蛋白、CCr。 7.肾组织总RNA，的提取及RT-PCR检测iNOS mRNA的相对表达。 8.密度梯度离心法提取肾组织线粒体，Lowry法蛋白定量后应用Westem-blotting测定线粒体NT的生成。 结论: 1.STZ诱导DM大鼠10周时，肾组织iNOS mRNA的表达显著增加。 2.病理各组肾组织免疫组化显示 NT 生成显著增加，表明ONOO对蛋白质的硝基化作用可能是构成肾脏损伤的重要途径。 3.Western blotting检测结果显示，病理各组肾组织线粒体NT生成量显著增加，说明ONOO对线粒体的氧化硝基化损伤，是造成DM肾脏损伤的重要机制。 4.养阴活血方药能抑制iNOS的表达，减少ONOO的生成及其对线粒体的硝基化损伤，对防治DN有较好效果。 5.氨基胍作为iNOS的选择性抑制剂，能有效地减少ONOO的生成，从而减弱对线粒体的硝基化损伤，对防治DN有一定的作用。