【摘 要】
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目的:通过观察“消疤草”对大鼠肝纤维化组织CD147表达的影响,探索“消疤草”预防大鼠肝纤维化的作用机理,为苗药“消疤草”的开发利用提供理论依据。方法:72只Wistar大鼠随机地分为正常对照组、模型组、扶正化瘀组、“消疤草”高(原液)、中(1/5原液)、低(1/10原液)剂量组共6组,每组12只。除正常对照组外,其余各组别均予40%CCl4葵花籽油液经皮下注入、腹腔注射猪血清、30%酒精灌胃(每
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目的:通过观察“消疤草”对大鼠肝纤维化组织CD147表达的影响,探索“消疤草”预防大鼠肝纤维化的作用机理,为苗药“消疤草”的开发利用提供理论依据。方法:72只Wistar大鼠随机地分为正常对照组、模型组、扶正化瘀组、“消疤草”高(原液)、中(1/5原液)、低(1/10原液)剂量组共6组,每组12只。除正常对照组外,其余各组别均予40%CCl4葵花籽油液经皮下注入、腹腔注射猪血清、30%酒精灌胃(每周2次),每日高脂饲料喂养建立复合因素肝纤维化模型。造模的同时,所有组每日1次以对应药物进行灌胃干预(按1ml/100g灌胃),正常对照组与模型组均给予等渗生理盐水,在8周后处死全部大鼠,并取下大鼠肝右叶相应的肝组织,采用HE染色、Masson染色方法观察肝脏组织病理评价造模情况及各干预组预防肝纤维化效果,采用PCR、免疫组化、Western-Blot方法分别测定各组肝组织CD147的表达情况。结果:(1)HE染色、Masson染色结果表明正常对照组肝脏未见显著的病理变化,而模型组中见典型的假小叶出现,表明肝纤维化模型造模成功;扶正化瘀组、“消疤草”高、中剂量组的肝脏炎症及纤维化严重程度较模型组减轻。肝组织内胶原面积测定中正常对照组最小,而模型组最大,其他各组别均小于模型组,除“消疤草”低剂量组外(P=0.3),各组与模型组相相比差异具有统计学意义(P<0.05)。扶正化瘀组与“消疤草”各组间相相比均有意义(P<0.05)。(2)RT-PCR结果表明正常对照组CD147m RNA的相对表达总量明显小于模型组(1.06758±0.24203比3.87189±0.99545,P<0.05);扶正化瘀组与“消疤草”各干预组均能降低肝组织中CD147m RNA的表达,扶正化瘀组与模型组相比差异显著(2.53940±0.74685比3.87189±0.99545,P<0.05);各干预组中以“消疤草”高剂量组的表达量下降最明显(1.79918±0.40015),其与扶正化瘀组的相比差异显著(P=0.018);“消疤草”各组间相比,“消疤草”高剂量组与中、低剂量组的差异显著(P<0.05)。(3)免疫组化结果表明,正常对照组在门静脉、汇管区的细胞膜上有少量CD147阳性表达,但整体胞质染色较浅;模型组在门静脉、汇管区有大量的阳性细胞,为深棕色,胞质着色明显,为强阳性表达;正常对照组平均光密度数值(AOD)为(0.00036±0.00041),模型组AOD为(0.00311±0.00164),两组相比差异显著(P=0.00);扶正化瘀组AOD值较模型组明显下降(0.00179±0.00043比0.00311±0.00164,P=0.023);扶正化瘀组与“消疤草”各组均可见阳性细胞数量较模型组下降,“消疤草”各组与扶正化瘀组相比差异不显著(P>0.05);“消疤草”各组间相比,其中“消疤草”高、低剂量组差异显著(0.00119比0.00235,P=0.031)。(4)Western blot结果显示正常对照组中CD147表达量较模型组明显降低(0.18682±0.03852比0.75402±0.03866,P<0.05),扶正化瘀组及“消疤草”各干预组均能降低肝组织CD147的灰度值,扶正化瘀组和模型组相比有明显区别(0.57154±0.06903比0.75402±0.03866,P=0.00),各干预组中以“消疤草”高剂量组的灰度值最低,且其与扶正化瘀组及“消疤草”中、低剂量组的相比差异显著(P<0.05)。结论:(1)采用酒精灌胃、猪血清腹腔注射、饲喂高脂饲料及CCl4皮下注射能成功制造复合因素肝纤维化模型。(2)“消疤草”能有效预防复合因素所致肝纤维化。(3)“消疤草”预防肝纤维化的作用机制之一可能是通过下调肝纤维化组织中CD147的表达实现的。
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