目的:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的功能是通过募集和激活巨噬细胞来驱动鼻咽癌(NPC)转移,但在肿瘤微环境中GM-CSF的来源和调控机制尚不清楚。本研究旨在分析鼻咽癌细胞是否分泌GM-CSF,探讨其表达是否存在耐受现象以及探讨GSK3途径是否参与调控GM-CSF表达。分析肿瘤坏死因子α(TNFα)预处理下诱导的GM-CSF生成耐受的机制,阐明GSK3途径在肿瘤微环境中调节TNFα诱导的GM-CSF表达的具体机制,为临床干预肿瘤发展,寻找肿瘤治疗靶点提供理论依据。方法:1.ELISA检测鼻咽癌细胞表达GM-CSF细胞因子的含量;2.QRT-PCR检测GM-CSF、A20 mRNA表达水平;3.Western blot检测CNE1、CNE2、5-8F细胞中p-GSK3α(T279)、p-GSK3β(T216)、A20、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-P38、P38、p-P65、P65及GAPDH蛋白的表达;4.脂质体转染A20过表达质粒,使CNE1、5-8F细胞过表达A20蛋白。结果:在这项研究中,我们发现TNFα在鼻咽癌CNE1,CNE2和5-8F细胞中诱导了GM-CSF的时间依赖性和剂量依赖性。GM-CSF产生具有耐受性,用TNFα预处理NPC细胞会下调TNFα再处理诱导的GM-CSF产生。TNFα活化GSK3,GSK3的激活下调了GM-CSF的产量。药理抑制GSK3信号转导上调GM-CSF表达,并且可以逆转TNFα再处理所引起的GM-CSF耐受。TNFα诱导的GM-CSF耐受与泛素编辑酶A20无关,A20的过表达不能调节TNFα诱导的GM-CSF产生。然而,GSK3抑制上调了ERK的活化,促进了TNFα诱导的GM-CSF的产生,这表明GSK3通过ERK信号对TNFα诱导的GM-CSF产生了负调控。GSK3途径可能是在肿瘤微环境中调节TNFα诱导的GM-CSF的靶标。结论:1.鼻咽癌细胞中,TNFα诱导耐受性的GM-CSF表达。2.A20不参与调节TNFα诱导GM-CSF表达。3.ERK通路参与调节TNFα诱导GM-CSF表达。4.GSK3通过抑制ERK的活性下调TNFα所诱导GM-CSF。