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为了研究传染性法氏囊病在我国不同地区的毒株流行特点及遗传变异规律,本研究应用RT-PCR方法对2005~2011年间分离的37株传染性法氏囊病病毒分离株进行了VP2基因高变区的测序和分析。通过与vvIBDV的七肽区、两个亲水区氨基酸、四个特征性氨基酸(222A、256I、294I、299S)及毒力细胞嗜性主要决定位点(253Q、279D、284A、330S)比较发现:分离株CK/JL/DH21005和CK/SD/LY21005的七肽区333位氨基酸由S变为N。CK/SD/LX61003等9株分离株的两个亲水区氨基酸均发生变化,但并没有规律性。分离株CK/SD/RZ20904、CK/SD/GM21105和CK/SD/ZC10706222位氨基酸由A变为T。所有分离株在253、284、330位的氨基酸比较保守,但CK/SD/LX30901等8株分离株在279位点出现规律性的氨基酸变化D279N。
对37株分离株进行系统进化树、基因同源性及主要特征性氨基酸的综合分析推测:分离株CK/SD/LY10810和CK/LN/PJ1103为2512中等毒力疫苗毒株;分离株CK/SD/GM21105为变异株;剩余34株分离株为超强毒株。但该结果还需要结合动物实验进一步进行判定。2010年间分别从三个省份分离到的3个毒株CK/XJ/WLMQ1007、CK/LN/DL1001、CK/SD/LX81007处于同一基因群VV1,彼此之间同源性较高,但是这三个省份之间的空间距离较远,说明在空间上相距较远的地区有同一基因群的毒株在流行。2007-2011期间对山东青岛地区某规模化养鸡场进行了持续分离的七株病毒。除CK/SD/LX30901D279N以外,这七株分离株虽然都具有超强毒株的特征性氨基酸,但是在基因进化树中CK/SD/LX30901、CK/SD/LX61003、CK/SD/LX81007、CK/SD/LX101102位于VV1分支,CK/SD/LX10706、CK/SD/LX20809、CK/SD/LX50912位于VV4分支,是不同群的毒株。这说明在同一地区不同时间内流行的毒株比较复杂,往往有几个群的毒株同时在流行。
结论:所调研地区鸡IBDV毒株的流行状况很复杂,没有出现明显的时间和地域特征。近七年流行的毒株以超强毒株为主,并且带有特征性氨基酸变异D279N的毒株曾在不同地区流行。
本研究应用RT-PCR方法对分离株CK/SD/LX30901和CK/DB(Ⅰ)09全基因A、B两片段进行了测序和分析。对其全基因序列进行分析后表明两株分离株均为超强毒株A片段与减毒株B片段的重配毒株。动物实验表明两个毒株并不能引起鸡只的死亡,这说明了VP1与IBDV毒力相关,重组减毒株B片段可以使毒株的致病力明显降低。