【摘 要】
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该文系统的研究了重组大肠杆菌表达白细胞介素-11(IL-11)融合蛋白的发酵工艺条件.摇瓶实验中,确定了以M9培养基为最佳高密度发酵培养基.同时,对诱导剂进行优化,采用0.005g/L
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该文系统的研究了重组大肠杆菌表达白细胞介素-11(IL-11)融合蛋白的发酵工艺条件.摇瓶实验中,确定了以M9培养基为最佳高密度发酵培养基.同时,对诱导剂进行优化,采用0.005g/L的IPTG就能有效的诱导外源基因表达,大大节约了成本.在10L发酵罐中,采用了流加方式进行了高密度发酵.尝试了两种培养基:一种是以葡萄糖为主要碳源,另一种是以甘油为主要碳源.得到最佳发酵条件为:温度30度;诱导前pH为6.8-7.0,诱导后为7.2;在OD<,600>为15左右时诱导,诱导后3.5个小时结束发酵.在以葡萄糖为主要碳源时,可得菌体湿重65g/L,干重8.4g/L,表达量为18﹪;在以甘油为主要碳源时,可得菌体湿重80g/L,干重9.2g/L,表达量为22﹪.同时,采用了人工神经网络预测菌体生长曲线,有利于培养条件的确定.该文还详细的研究了白细胞介素-11融合蛋白的亲和纯化工艺,主要涉及菌体破碎、平衡缓冲液对融合蛋白IL-11吸附的影响和融合蛋白IL-11的洗脱条件优化等,经纯化后,IL-11的纯度达80﹪,回收率达80﹪.
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