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实验目的:
1)用头孢西丁纸片扩散法筛查MRSA并对该方法进行评价。
2)在此基础上,研究MRSA中mecⅠ和mec启动子区的多态性分布,分析这种多态性的流行病学及与苯唑西林MIC的关系。
3)根据mecⅠ的多态性,原核表达MecⅠ蛋白,以期进一步研究变异MecⅠ蛋白在MRSA耐药中的作用。
结论:
1.用头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性高,可作为临床确证MRSA的表型检测方法。
2.上海地区临床分离的MRSA菌株多数为同一个分子型别,说明在上海地区存在单一、流行的MRSA克隆。
3.mecⅠ或mec启动子突变在临床MRSA中普遍存在,以mecⅠ202位碱基突变最常见。从一定程度上解释了临床MRSA对苯唑西林耐药的机制。
4.错配PCR作为检测已知基因突变的方法,操作简便、准确率高,值得推广应用。
5.MecⅠ蛋白可用表达载体pGEX-4T-2在大肠杆菌BL21中表达,为进一步研究变异MecⅠ蛋白在MRSA耐药中的作用奠定了基础。