【摘 要】
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狮头鹅是我国著名的地方品种及唯一的大型鹅种,以卓越的肉用性能而闻名,有“世界鹅王”之美誉,但就巢性极强,产蛋量极少,严重阻碍其产业化发展。传统的产蛋性能选育方法耗时耗力且不能从遗传上减少狮头鹅的就巢性,致使遗传进展缓慢。分子标记辅助选择技术不受外界影响,准确有效的筛选出与产蛋性能密切相关的基因,了解这些基因对产蛋与就巢等性状的调控机制并应用于育种实践,对狮头鹅重要经济性状的分子育种及产业发展具有重
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狮头鹅是我国著名的地方品种及唯一的大型鹅种,以卓越的肉用性能而闻名,有“世界鹅王”之美誉,但就巢性极强,产蛋量极少,严重阻碍其产业化发展。传统的产蛋性能选育方法耗时耗力且不能从遗传上减少狮头鹅的就巢性,致使遗传进展缓慢。分子标记辅助选择技术不受外界影响,准确有效的筛选出与产蛋性能密切相关的基因,了解这些基因对产蛋与就巢等性状的调控机制并应用于育种实践,对狮头鹅重要经济性状的分子育种及产业发展具有重要意义。MAP2K1基因是本课题组前期通过全基因组重测序分析高产吉林籽鹅(年均产蛋量>90枚)和低产狮头鹅(年均产蛋量≤30枚)筛选出与产蛋量相关的重要候选基因之一。为解析狮头鹅MAP2K1基因在就巢期与产蛋期卵巢组织的表达,本研究以500 d的狮头母鹅为试验对象,对该基因的SNP位点进行了筛选与分析;采集就巢期与产蛋期卵巢组织,观察其形态学与组织学的差异;并通过q PCR、WB和IHC等技术,检测MAP2K1基因的表达规律。结果如下:(1)狮头鹅MAP2K1基因SNP位点的筛查及生物信息学分析狮头鹅MAP2K1基因有1个SNP位点,即g.1781150 G>A,为外显子同义突变,MAP2K1基因的GG基因型可能影响狮头鹅产蛋性能。生物信息学预测显示,MAP2K1基因突变前后编码氨基酸并未发生改变,MAP2K1基因突变前后m RNA的最小自由能、质心二级结构、点-括号分析等发生改变,揭示MAP2K1基因突变前后功能和生物活性可能不同,为后续提高狮头鹅产蛋量候选基因的功能鉴定提供了理论依据。(2)就巢期与产蛋期卵巢组织形态学和组织学比较产蛋期鹅体重、卵巢重、等级卵泡重、等级前卵泡重和卵巢指数极其显著高于就巢期(P<0.001)。产蛋期LWF和SYF数量显著或极显著高于就巢期(P<0.05/P<0.01)。产蛋期卵巢颗粒层厚度和整个膜层厚极其显著高于就巢期(P<0.001),产蛋期SWF颗粒层厚度显著高于就巢期(P<0.05),产蛋期LWF与SYF颗粒层厚度极显著高于就巢期(P<0.01)。说明狮头鹅就巢期与产蛋期卵巢组织的形态学和组织学有明显差异,为后续MAP2K1基因在就巢期与产蛋期卵巢组织不同的表达规律提供理论依据。(3)狮头鹅MAP2K1基因在就巢期与产蛋期卵巢组织的表达规律HPRT1基因为就巢期与产蛋期卵巢组织的最佳内参基因。产蛋期卵巢的MAP2K1m RNA相对表达量显著高于就巢期(P<0.05),产蛋期垂体、下丘脑的MAP2K1 m RNA相对表达量极其显著高于就巢期(P<0.001),产蛋期SWF的MAP2K1 m RNA相对表达量极显著高于就巢期(P<0.01),而就巢期LWF、SYF的MAP2K1 m RNA相对表达量极显著高于产蛋期(P<0.01)。MAP2K1蛋白在产蛋期卵巢的灰度值显著高于就巢期(P<0.05),产蛋期垂体、下丘脑灰度值极其显著高于就巢期(P<0.001),就巢期SWF、LWF、SYF灰度值显著高于产蛋期(P<0.05)。MAP2K1蛋白在就巢期与产蛋期狮头鹅卵巢组织中均能检测到信号,主要分布在细胞质。产蛋期卵巢和SWF的IOD值极显著高于就巢期(P<0.01),产蛋期垂体和下丘脑的IOD值极其显著高于就巢期(P<0.001),而就巢期LWF和SYF的IOD值极显著高于产蛋期(P<0.01)。通过q PCR、WB与IHC技术检测MAP2K1基因在就巢期与产蛋期狮头鹅下丘脑、垂体、卵巢组织的表达规律,发现在就巢期中卵巢的表达量最高,而产蛋期中垂体的表达量最高,且在下丘脑、垂体、卵巢的表达量均高于卵泡,狮头鹅MAP2K1基因可能通过下丘脑、垂体、卵巢表达,可为后续研究就巢期和产蛋期MAP2K1基因m RNA表达与血清生殖激素水平相关性分析提供理论依据。(4)就巢和产蛋期MAP2K1基因m RNA表达与血清生殖激素水平相关性分析产蛋期FSH、E2激素水平极其显著高于就巢期(P<0.001),就巢期Gn RH、PRL、LH激素水平极其显著高于产蛋期(P<0.001)。就巢期垂体、卵巢和下丘脑的MAP2K1m RNA表达量分别与E2、LH、PRL激素水平呈显著正相关(P<0.05),SYF和LWF的MAP2K1 m RNA表达量分别与LH和PRL激素水平呈极显著正相关(P<0.01)。产蛋期F3的MAP2K1 m RNA表达量与FSH激素水平呈显著正相关(P<0.05),垂体、F1的MAP2K1 m RNA表达量与PRL激素水平呈显著正相关(P<0.05)。说明MAP2K1基因m RNA表达与血清激素水平密切相关,就巢期与产蛋期血清激素水平差异明显。
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