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3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是在生物体内广泛存在的酶,在糖酵解和糖异生过程中起重要作用。GAPDH可参与植物的抗逆反应,研究GAPDH基因的表达调控对于提高小麦抗逆性,进而增加小麦的产量具有非常重要的意义。GAPDH基因家族可以分为四个亚家族:GAPC,GAPA/B,GAPCp和NP-GAPDH。其中GAPC作为GAPDH基因家族的重要成员,在植物生命活动中起着重要的作用。本实验运用绿色荧光蛋白(GFP)亚细胞定位技术研究TaGAPC5基因在洋葱表皮细胞中的定位情况,为研究GAPDH抗旱调控途径奠定基础。且本课题组在前期的研究中已克隆出TaGAPC5基因的全长序列,并通过基因枪介导将TaGAPC5基因过表达载体转入水敏感性小麦品种郑引1号中,将RNAi载体转入抗旱性小麦品种长武134中,获得了目标基因稳定表达的转基因株系T1代。为了进一步确定转基因植株的稳定性,本实验的主要目的是在T1代的基础上获得T2代的种子并对其进行阳性验证,继续进行培养得到T2代的转基因植株,进行相关生理指标的测定和分子生物学鉴定,检测目的基因的表达量,从而验证该基因的功能。试验结果如下:1.将T1代转基因型及野生型种子进行种植、培养,建立起转基因小麦的培养体系。发现转入目的基因会对植株的生长状况产生一定的影响。成功获得T2代种子,对T2代种子进行PCR检测。结果为阳性,初步推断在T2代转基因阳性植株中:郑引1号有4个株系,长武134有2个株系。2.在转基因小麦中初步验证了TaGAPC5基因的功能,结果表明,在T2代长武134转基因植株中,TaGAPC5基因的表达量为受体对照的18%,说明RNAi载体成功转入并且干扰了基因的表达;对于郑引1号品种来说,T2代转基因植株TaGAPC5基因的表达量为受体对照的4%,说明TaGAPC5基因的转入并没有使其表达量发生明显的变化,TaGAPC5基因的表达量会随着干旱胁迫时间的变化而发生变化。干旱胁迫下相关生理指标的结果表明,TaGAPC5基因在转基因小麦中的表达会对植株的抗旱性产生一定的影响。3.构建绿色荧光蛋白融合表达载体,利用基因枪轰击洋葱表皮细胞,培养后在激光共聚焦显微镜下观察目的蛋白的亚细胞定位情况。结果在转化16318-GFP空载体的洋葱表皮细胞中,绿色荧光散布于整个细胞中。在转化16318-TaGAPC5-GFP的洋葱表皮细胞中,在细胞膜,细胞器膜和细胞核膜三个部位都观察到了绿色荧光,说明TaGAPC5基因定位于整个生物膜系统。