枳术汤对脾虚型便秘小鼠结肠cAMP、PKA及AQP3影响的实验研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dlinc
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目的:运用番泻叶泄泻、限制饮水、饥饱失常的复合方法,制备脾虚型便秘小鼠模型。将造模成功的小鼠用枳术汤干预治疗,对小鼠的排便情况及小鼠粪便含水率、小肠墨汁推进率进行观察分析,通过检测小鼠结肠中水通道蛋白3(AQP3)、环磷酸腺苷(c AMP)、蛋白激酶A(PKA)的蛋白表达水平,探讨枳术汤治疗脾虚型便秘过程中的作用机制。方法:首先制备脾虚型便秘小鼠模型:将60只SPF级小鼠分为模型组50只、空白对照组10只。模型组小鼠用番泻叶进行灌胃,持续7天,期间自由饮食饮水;造模第八天停止灌胃番泻叶,并将鼠粮更换成低纤维饲料生大米,期间限制小鼠饮水,持续8天后,造模成功,将模型组分为:枳术汤高浓度组、枳术汤中浓度组、枳术汤低浓度组、麻仁软胶囊组以及模型组,造模成功后对各组小鼠的粪便进行搜集,检测出各组小鼠在治疗前的粪便含水率并测量出各组小鼠的体重。然后,进行7天的药物干预治疗,检测出经药物治疗后各组小鼠的粪便水率和各组小鼠的体重情况,比较治疗前后各组小鼠粪便水含率和体重的变化。并将所有组别的小鼠在末次给药后,禁食禁水24h,次日用自制墨汁按照0.2ml/10g计量进行灌胃,取材后计算出各组小鼠的小肠墨汁推进率。并截取小鼠部分结肠组织,运用免疫组化及蛋白质免疫印迹的方法检测c AMP、PKA及AQP3的蛋白表达含量。结果:1.造模情况:造模第七天,小鼠出现消瘦、疲惫、食少、毛色枯槁,排便次数增多,粪质较稀等现象,这表明小鼠前期脾虚状态建立成功。在造模第15天后,模型组小鼠体重变化不大,毛发粗糙缺乏光泽,皮肉松弛,便质干硬且粪粒偏小,有的小鼠甚至有直肠粘膜脱垂的症状,与临床上脾虚型便秘的患者症状相似,可见脾虚型便秘小鼠模型造模成功。2.药物治疗:经枳术汤治疗后,小鼠的排便情况有明显改善,各组小鼠的体重也发生了变化,其中枳术汤高浓度组和枳术汤中浓度组与模型组相比,小鼠的体重均有明显增长(P﹤0.01);与模型组相比,高、中浓度枳术汤组的小鼠粪便含水率有显著提高(P﹤0.01)。高、中浓度枳术汤组和模型组相比,小鼠小肠墨汁推进率有较明显的提升(p﹤0.01)。3.免疫组化检测:小鼠取材后,选取结肠组织,将其固定,包埋,切片,染色,最终观察结肠中c AMP、PKA、AQP3的蛋白含量变化。观察平均光密度值,发现高、中浓度枳术汤组与模型组相比,小鼠结肠中c AMP、PKA、AQP3的蛋白含量均有显著的提升(P﹤0.01)。4.蛋白质免疫印迹检测:经检测发现,与模型组相比,高、中浓度枳术汤组小鼠结肠中c AMP、PKA、AQP3的蛋白相对表达情况有明显的的提升(P﹤0.01)。结论:1.使用番泻叶腹泻、限制饮水、饥饱失常的复合方法可以成功的复制出脾虚型便秘小鼠模型,且较为稳定。2.脾虚型便秘小鼠的结肠中c AMP、PKA、AQP3的蛋白表达含量均有所下降。3.高、中浓度的枳术汤对于脾虚型便秘有明显的治疗作用,能够加快结肠推进率,增加粪便的含水率。4.枳术汤可能是通过提高结肠中c AMP、PKA、AQP3的蛋白含量来减少结肠对水液的重吸收,改善小鼠的排便情况。5.枳术汤能有效治疗脾虚型便秘,其中高浓度及中浓度的枳术汤治疗效果较佳。
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