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流感病毒表面血凝素(HA,Haemagglutinin)蛋白可以识别宿主细胞表面受体,决定流感病毒的宿主嗜性。HA蛋白的受体结合特性的转变是其跨物种传播的先决条件。AIV获得结合人上呼吸道的人源受体(?-2,6SA)的能力可能使其跨物种感染人,进而在人与人之间稳定传播造成流感大流行。2013年A/TaiWan/2/2013(H6N1)优先识别?-(17),6SA并感染人,研究表明HA蛋白上P186L、E190V和G228S造成A/TaiWan/2/2013(H6N1)偏好结合?-(17),6SA。本实验室研究发现,我国虽然尚未出现优先识别?-(17),6SA的H6亚型AIV,但是34%的病毒已经获得结合?-(17),6SA的能力,并具有在豚鼠间高效接触传播能力。本研究通过序列比对筛选到受体结合区相差五个氨基酸位点的两株病毒,A/Chicken/Guang Dong/S1312/2010(H6N2)(以下简称GD/S1312)同时具有结合?-(17),3SA和?-(17),6SA的能力,而A/Chicken/HuNan/S3003/2009(H6N6)(以下简称HuN/S3003)只具有结合?-(17),6SA的能力。为了探讨哪些氨基酸位点使我国H6亚型AIV获得识别?-(17),6SA能力和评估我国H6亚型AIV会不会在自然进化过程中通过氨基酸突变获得专性结合?-(17),6SA的能力,我们以rGD/S1312为模式毒株利用反向遗传操作技术和糖链固相ELISA实验评估HA蛋白上T128A、N131D、E133D、N192E、D199N和P186L、E190V、Q226L、G228S、Q226L/G228S 10个氨基酸位点突变对rGD/S1312受体结合特性的影响,结果显示128T、131N、133E在rGD/S1312获得结合?-2,6SA能力中起重要作用,128T、131N、133E可能使H6亚型禽流感病毒获得结合?-2,6SA的能力。Q226L、G228S以及Q226L/G228S能够使rGD/S1312结合?-2,6SA能力高于结合?-2,6SA的能力,其中Q226L能够使rGD/S1312获得专性结合?-2,6SA的能力。本研究通过豚鼠传播实验检测了获得偏好结合?-(17),6SA能力的rGD/S1312-Q226L/G228S、rGD/S1312-Q226L和rGD/S1312-G228S在豚鼠上的复制能力和呼吸道飞沫传播能力。结果表明HA蛋白上Q226L和Q226L/G228S能够使rGD/S1312获得在哺乳动物间低水平呼吸道飞沫传播能力。综上所述,H6亚型AIV对人类生命健康造成威胁。H6亚型AIV rGD/S1312可以通过Q226L或Q226L/G228S突变获得偏好性结合?-2,6SA的能力,虽然其在豚鼠间通过呼吸道飞沫传播能力低,但是不能排除其通过累积基因突变或者基因重组获得高水平传播能力的可能。本研究从分子水平上阐明了H6亚型AIV受体结合特性转变机制,对流感大流行的预警具有重要的意义。