高产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶菌株的发酵工艺研究

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从sp.R、sp.S、sp.39、sp.42、sp.00、sp.48、sp.848和sp.90八株霉菌中,选出了4种具有较高Genistin酶活力的菌株,它们分别是sp.R、sp.42、sp.00和sp.48,利用液体发酵的方法比较这四种霉菌的产酶活性,发现sp.R菌株产酶活力最高。sp.R菌株产Genistin水解酶的最佳发酵条件为:2.5%的麦麸为碳源,1%的硝酸钠为无机氮源,0.5%的蛋白胨为有机氮源,培养基起始pH7.0,瓶装体积为40mL/250mL,接种量10%,培养温度30℃,摇瓶转数160rpm,培养时间84h。在此发酵条件下,sp.R菌株产酶活力为82U/mL。 对大豆异黄酮的生理活性进行了研究。通过邻苯三酚自氧化法和比色法测定Fenton反应产生的羟自由基的方法,对大豆异黄酮的抗氧化活性进行了比较研究。通过MTT比色法,对大豆异黄酮的抗肿瘤能力进行了研究。利用转基因酵母法对大豆异黄酮的雌激素活性进行了研究。结果表明:酶解甙元,糖甙型大豆异黄酮对超氧自由基的消除率达到50%时所需要的用量即IC50分别为0.14mg/mL,0.32mg/mL,对羟基自由基的清除率达到50%时所需要的用量即IC50分别为0.57mg/mL,0.63mg/mL。大豆异黄酮酶解甙元对大鼠肝癌7919细胞生长抑制率达到50%时所需要的用量即IC50为7.55mg/L,糖甙型大豆异黄酮对大鼠肝癌7919细胞生长抑制率达到50%时所需要的用量即IC50为10.35mg/L。大豆异黄酮酶解甙元的雌激素活性达到50%时所需要的浓度即EC50为0.31mg/L,糖甙型大豆异黄酮的雌激素活性达到50%时所需要的浓度即EC50为9.94mg/L。酶解甙元生理活性强于相应的糖甙型大豆异黄酮。
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