【摘 要】
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大鲵(Andrias davidianus),俗称“娃娃鱼”,是我国特有的大型两栖动物,分布在湖南、湖北以及陕西等省区,含有多种生物活性物质,在食品、保健食品以及日化产品等方面有着广阔的发展前景。目前,大鲵养殖技术已完全成熟,养殖的大鲵数量急速增加,但大鲵的应用尚处于鲜食阶段,而对于大鲵精深加工利用在日化行业的研究还不多。本论文以大鲵为原材料,对大鲵低聚肽进行制备、分离纯化及肽段合成,对其结构特征
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大鲵(Andrias davidianus),俗称“娃娃鱼”,是我国特有的大型两栖动物,分布在湖南、湖北以及陕西等省区,含有多种生物活性物质,在食品、保健食品以及日化产品等方面有着广阔的发展前景。目前,大鲵养殖技术已完全成熟,养殖的大鲵数量急速增加,但大鲵的应用尚处于鲜食阶段,而对于大鲵精深加工利用在日化行业的研究还不多。本论文以大鲵为原材料,对大鲵低聚肽进行制备、分离纯化及肽段合成,对其结构特征、生物活性比较及在面膜中的应用进行研究。主要内容如下:(1)大鲵低聚肽生物活性的研究。酶解制备出大鲵低聚肽,再经过葡聚糖凝胶LH-20进行分离纯化后,得到ADOP1和ADOP2两个组分。结果表明:大鲵低聚肽对DPPH·、ABTS+·、OH·和O2-·均具有清除作用,对DPPH·清除率为83.83±0.45%,ABTS+·清除率为71.91±0.34%,OH·清除率为38.34±1.70%和O2-·清除率为86.65±0.59%,且清除自由基能力大小为O2-·>DPPH·>ABTS+·>OH·;将大鲵低聚肽与不同品种的生物活性肽、不同品牌的大鲵肽及不同分离纯化组分进行抗氧化能力比较,说明其具有强的抗氧化能力。大鲵低聚肽对酪氨酸酶具有抑制作用,与不同分离纯化组分进行酪氨酸抑制能力比较,证明其具有强的酪氨酸酶抑制能力。大鲵低聚肽对变形杆菌等菌没有表现出抑制作用。RAW264.7小鼠巨噬细胞与大鲵低聚肽共同培育后,发现大鲵低聚肽对RAW264.7小鼠巨噬细胞的生长具有增殖作用。(2)大鲵低聚肽的结构表征及其合成肽段生物活性比较验证。通过对大鲵低聚肽进行傅里叶红外光谱图分析,鉴定其结构中存在酰胺官能团和咪唑官能团,含有羟基、醚、β-折叠结构和无规卷曲二级结构。通过质谱分析鉴定出其为低聚肽。序列分析共鉴定出81条肽段,筛选评分前三的序列进行肽段合成。通过固相法合成、HPLC色谱分析和质谱鉴定,共得到SR-16、IR-7和VK-14三种合成肽,并对其生物活性进行验证,发现三种合成肽的抗氧化能力SR-16>VK-14>IR-7;酪氨酸酶抑制能力SR-16>IR-7>VK-14和对RAW264.7小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖作用强弱为VK-14>SR-16>IR-7,均没有大鲵低聚肽强。抑菌活性对比,SR-16与大鲵低聚肽均对变形杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产气肠杆菌和希瓦氏菌没有抑菌圈;200mg/m L的IR-7溶液对上述六种菌均有明显的抑菌圈,并随着浓度的降低抑菌圈直径逐渐缩小;200mg/m L的VK-14溶液对枯草芽孢杆菌和希瓦氏菌有抑菌圈,但抑菌效果不如IR-7明显。(3)以大鲵低聚肽为原料制备美白面膜,通过保湿率、干燥时间、粘度为指标的单因素试验确定面膜最佳配方,对面膜的理化指标、稳定性以及感官评价进行研究。结果表明:甘油5%、聚乙烯醇0.5%、羧甲基纤维素钠1%、丁二醇4%、透明质酸钠0.5%、三乙醇胺0.5%、卡波姆0.5%、尿囊素0.5%、大鲵低聚肽0.5%、尼泊金甲酯和香精适量,去离子水加至100%是美白面膜最佳配方;面膜的干燥时间为960s,粘度在74~76 Pa·s之间,p H变化范围为5.8~6.3,均符合国家标准;面膜耐热、耐寒和冷热交替性好,离心后未出现分层现象,稳定性好;面膜使用前澄清透明色泽良好,无明显异味,使用时流动性好不油腻,使用后皮肤白嫩如霜,作用温和。
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