【摘 要】
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高血压和糖尿病是心血管疾病主要的诱导因素,而心血管疾病是目前全世界死亡率最高的疾病。目前对于治疗高血压和糖尿病的药物虽有一定的效果,但都具有一定的副作用,开发天然无副作用的活性物质已成为当前研究热点。巴旦木作为四大干果之一,有着“圣果”之称,其蛋白含量较高,氨基酸比例合理,符合FAO/WHO推荐的营养模式,是一种优质的蛋白资源,然而目前对巴旦木的加工仍以粗加工为主,对巴旦木的营养价值利用效率较低。
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高血压和糖尿病是心血管疾病主要的诱导因素,而心血管疾病是目前全世界死亡率最高的疾病。目前对于治疗高血压和糖尿病的药物虽有一定的效果,但都具有一定的副作用,开发天然无副作用的活性物质已成为当前研究热点。巴旦木作为四大干果之一,有着“圣果”之称,其蛋白含量较高,氨基酸比例合理,符合FAO/WHO推荐的营养模式,是一种优质的蛋白资源,然而目前对巴旦木的加工仍以粗加工为主,对巴旦木的营养价值利用效率较低。为了促进巴旦木的深加工利用,本课题以巴旦木脱脂粉为原料,通过碱溶酸沉法提取巴旦木蛋白,用单酶和双酶对巴旦木蛋白进行酶解得到活性较高的血管紧张素转换酶(ACE)抑制组分与α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制组分,并进行氨基酸序列鉴定,最后利用细胞实验验证其降血压和降血糖活性,主要研究内容如下:(1)使用单酶与双酶组合酶解巴旦木蛋白,以ACE抑制活性、α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性为考察因素,得到碱性蛋白酶+复合蛋白酶组合酶解产物的ACE抑制活性最高(69.84%±3.07%),胰蛋白酶+复合蛋白酶酶解产物的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性最高(27.20%±2.06%和16.70%±0.51%)。经过超滤分离后,发现分子量低于3 k Da的酶解物具有更高的降血压或降血糖效果。将分子量小于3 k Da的超滤组分进一步通过Sephadex G-25分离,分别得到3个降血压肽组分(A1、A2和A3)和4个降血糖肽组分(B1、B2、B3和B4),降血压组分A3在浓度为1 mg/m L时ACE抑制率可达90.19%±1.61%,降血糖肽组分B4在浓度为5 mg/m L时α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性最高,为70.57%±3.34%和64.38%±3.9%。经UPLC-MS/MS鉴定组分A3和B4,分别得到8条多肽(LR、LYH、LY、TF、VF、LF、LW、FF)和8条多肽(RGL、LA、WH、LY、VF、LF、VW、FF)。(2)以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)模型为基础,研究了巴旦木ACE抑制肽组分A3对血管内皮细胞的影响,探究了巴旦木ACE抑制肽的降血压机制。结果表明,巴旦木ACE抑制肽对HUVECs细胞中一氧化氮(Nitric Oxide,NO)含量具有促进作用,对内皮素(Endothelin-1,ET-1)的分泌具有抑制作用。进一步利用荧光定量PCR技术分析发现,巴旦木ACE抑制肽能够通过下调ACE和ET-1 m RNA表达量,同时上调ACE2 m RNA表达量来达到降血压的作用。(3)以高浓度胰岛素为诱导剂建立胰岛素抵抗模型(IR-Hep G2),探讨巴旦木降血糖组分B4对IR-Hep G2的影响。结果表明,与模型组相比,浓度为1 mg/m L的组分B4对葡萄糖消耗量有显著性的提高(p<0.0001);浓度为0.6~1.0 mg/m L组分B4可显著性提高糖原含量(p<0.05)。组分B4在一定程度上可通过下调PEPCK、G6Pase和GP m RNA表达量,上调GYS1 m RNA表达量,进而达到降血糖的作用。
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