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鸭病毒性肝炎(DVH)是雏鸭的一种急性传染性病,主要侵害4周龄以内的雏鸭。该病由至少三种不同的病原引起,包括鸭甲肝病毒(DHAV).1型鸭星状病毒(DastV-1)口2型鸭星状病毒(DastV-2)。分布范围最广的D IAV属于小RNA病毒科禽肝病毒属。基于中和试验和系统发育分析,DHAV已被分为三种基因型(DHAV-1、 DHAV-2、DHAV-3)。其中,DHAV-1分布范围最广泛, DHAV-2仅在台湾发现报道,而近几年DHAV-3已经给我国大陆地区和韩国的养鸭业造成严重危害。DHAV-1与DHAV-2之间无交叉中和反应,DHAV-1和 DHAV-3之间交叉保护作用不明显。通过对雏鸭的临床症状和剖检病变可以初步对DVH进行诊断,但是该方法不能够区分DHAV-1 和 DHAV-3.目前血清学诊断技术和分子生物学诊断技术已经用DHAV的检测和诊断,血清学诊断技术主要包括中和试验、间接血凝试验、琼脂扩散试验和免疫荧光抗体技术等,但是由于其繁琐耗时和成本高,不能用于快速诊断。分子生物学诊断技术包括RT-PCR口RT-LAMP方法等,能够快速特异地对DHAV分离株和临床样品进行诊断,因此建立一种能够快速鉴别诊断DHAV-1和DHAV-3的一步法双重RT-PCR方法对我国DVH的防治有积极的作用。1.建立一步法双重RT-PCR方法用于检测DHAV-1和DHAV-3为了能够快速鉴别诊断DHAV-1和DHAV-3,本研究根据GenBank中DHAV-1和DHAV-3的全基因组序列,在DHAV-1和DHAV-3的基因保守区域分别设计了2对特异性引物,并成功建立一步法双重RT-PCR方法鉴别诊断DHAV-1和DHAV-3。该一步法双重RT-PCR方法能够分别针对DHAV-1和DHAV-3特异性地扩增出992bp和1533bp的目的片段,而对健康雏鸭肝脏组织、番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭圆环病毒、禽流感病毒、鸭疫里默氏菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌核酸的检测结果为阴性。该方法最低能够检测出lOpg DHAV-(?)DHAV-3的RNA,具有较高的敏感性。2.应用一步法双重RT-PCR方法检测DHAV-1和D HAV-3本研究中使用建立好的一步法双重RT-PCR方法DHAV人工感染雏鸭和DHAV分离株进行检测,结果显示该一步法双重RT-PCR方法的检测结果和病毒分离实验完全一致。应用建立好的一步法双重RT-PCR方法对从2012～2014年在四川、山东、湖北和广西省采集的52份疑似DVH病料进行检测,结果显示52份病料中有41份为DHAV-1阳性,11份为DHAV-3阳性,这些材料未发现混合感染情况。以上实验证明本研究中建立的一步法双重RT-PCR检测方法能够用于DHAV-1(?)DHAV-3的临床诊断和流行病学调查,并且检测结果表明我国四川、山东、湖北和广西省养鸭地区均有DHAV-1和DHAV-3的流行。综上所述,本研究中建立的一步法双重RT-PCR检测方法可以快速地鉴别诊断DHAV-1和DHAV-3的感染情况。