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目的: 肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)具有广泛的生物活性，是重要的致炎因子和免疫调节因子，是激活脂肪细胞及单核巨噬细胞分泌的一种细胞因子。临床实验表明，TNF-α伴随着糖尿病病情发展的整个过程，故动态检测血清TNF-α水平可作为临床监测糖尿病病情变化的客观指标，并为糖尿病病情提供临床信息。腺甘酸活化蛋白激酶(Adenosine monophosphate-activated proteinkinase，AMPK)是细胞内能量守恒的感受器，当细胞内AMP和ATP的比值升高到一定程度时，AMPK就会被激活，可在一定程度上调节血糖和血脂之间的水平。遗传学和药理学研究表明，AMPK是机体保持葡萄糖平衡所必需的。由于分子机制十分复杂，药物分子激活AMPK是一个巨大的挑战，但其激活能改善由2型糖尿病引起的代谢失衡。AMPK和MAPK(Mitogen-activated proteinkinases)信号传导通路之间具有复杂的相互作用。大量研究表明，MAPK/JNK又是AMPK信号通路的下游靶点之一。JNK(c-Jun N-terminal Kinases)途径参与了机体内一系列氧化应激和反应，可能与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能，炎症因子的表达有密切的联系。目前，对于选择性地调节的JNK途径是否通过TNF-α等其他信号通路影响胰岛素分泌并不是很清楚。近年来研究显示，JNK信号通路是胰岛素抵抗等代谢紊乱及相关炎症状态的关注点，是改善和治疗这些代谢紊乱状态的重要作用位点。本文探讨不同浓度的TNF-α对MIN6小鼠胰岛β细胞的增殖活性、细胞凋亡及胰岛素分泌的影响，并初步探讨TNF-α是否通过AMPK和JNK通路影响小鼠胰岛β细胞胰岛素分泌，能够为AMPK、JNK抑制剂作为防治2型糖尿病的潜在新靶点提供可靠的理论基础和应用依据。 方法: (1)用不同浓度的TNF-α(0 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml)作用胰岛MIN-6细胞8小时和24小时，通过CCK-8法检测细胞的增殖活性; (2)通过AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡试剂盒，流式细胞术检测细胞凋亡的情况; (3)分别用3 mM和30 mM葡萄糖刺激各组胰岛MIN6细胞，用小鼠胰岛素ELISA试剂盒检测胰岛素分泌水平; (4)通过western blot方法检测AMPK、p-AMPK、JNK、p-JNK的表达情况。 结果: (1)TNF-α对MIN6的细胞增殖活性的影响呈浓度与时间的反向依赖性。当TNF-α作用8小时，以对照组的存活率为100％，随着浓度的增大，细胞的存活率逐渐降低依次为95.91±3.38％、89.73±4.00％、87.47±4.86％和80.78±3.54％;当TNF-α作用24小时，以对照组的存活率为100％，随着浓度的增大，细胞的存活率逐渐降低依次为88.22±5.98％、81.06±7.26％、78.07±5.11％和75.61±4.35％; (2)TNF-α对MIN6的细胞凋亡的影响呈浓度与时间的正向依赖性。当TNF-α作用8小时，随着浓度的增大，细胞的凋亡率逐渐增高依次为3.58±1.76％、8.88±2.15％、13.21±2.26％、15.53±2.98％和21.78±2.75％;当TNF-α作用24小时，随着浓度的增大，细胞的凋亡率逐渐增高依次为3.92±1.82％、13.66±2.13％、20.16±5.71％、27.40±1.93％和34.77±4.90％; (3)TNF-α对MIN6的胰岛素分泌量的影响呈浓度与时间的反向依赖性。当TNF-α作用8小时，随着TNF-α浓度的增加，基础状态（3 mM葡萄糖）作用下，各组胰岛素分泌量呈逐渐降低趋势，但差异无统计学意义(P＞0.05)，高糖(30mM葡萄糖)作用下，各组胰岛素分泌量逐渐降低依次为161.75±9.87pg/ml、144.45±12.08 pg/ml、132.63±10.36 pg/ml、129.22±13.18 pg/ml和117.91±8.60pg/ml;当TNF-α作用24小时，随着TNF-α浓度的增加，基础状态作用下，各组胰岛素分泌量呈逐逐渐降低依次为129.68±9.47pg/ml、114.42±11.75 pg/ml、113.44±16.91pg/ml、102.29±7.74 pg/ml和97.30±6.80 pg/ml，高糖作用下，各组胰岛素分泌量逐渐降低依次为162.95±12.02 pg/ml、134.58±15.63 pg/ml、129.56±10.95 pg/ml、112.95±9.89 pg/ml和106.24±7.83 pg/ml; (4)TNF-α作用MIN6细胞8小时和24小时，随着TNF-α浓度的增加，各组AMPK、JNK蛋白的表达量无明显改变，而p-AMPK蛋白的表达量呈递减趋势，p-JNK蛋白的表达量呈递增趋势。 结论: 不同浓度的TNF-α作用于小鼠胰岛β细胞MIN6细胞后，随着时间的增加及TNF-α浓度的增高，细胞存活率、胰岛素分泌量以及p-AMPK蛋白表达量降低，细胞凋亡率、p-JNK蛋白表达量增多，结果显示TNF-α抑制MIN6细胞增殖、胰岛素分泌、细胞AMPK的磷酸化，并促进细胞凋亡以及JNK的磷酸化。提示TNF-α影响小鼠胰岛β细胞胰岛素的分泌可能是通过激活JNK途径和抑制AMPK途径，改变其磷酸化水平来实现。