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利用pET-28a(+)系统表达的重组鸡白细胞介素2(rchIL-2)主要以不溶性的包涵体形式表达。为了优化rchIL-2蛋白的制备工艺、提高收率,分析重组chIL-2蛋白的组分,本研究在提高可溶性rchIL-2产量表达工艺、菌体裂解工艺、纯化工艺及单体分离方面进行了探索,取得以下结果：1)在可溶性rchIL-2表达工艺方面,基因工程菌液的OD600值为1.5时加入0.01mmol/L IPTG进行诱导表达3小时是pET-28a(+)系统可溶性表达rchIL-2的最佳工艺,可溶性rchIL-2的表达量达到4mg/L左右。2)在基因工程菌体破碎方面,通过对冻融、溶菌酶和超声波的优化,证明在400瓦条件下超声波处理360秒是最佳细菌破碎工艺；3)在可溶性rchIL-2的纯化工艺方面,通过对纯化填料、pH值和载量的优化,证明应用Ni2+亲和层析柱在pH 7.4缓冲体系、30mM咪唑杂蛋白洗脱和250mM咪唑目的蛋白洗脱环境中获得3mg/L的可溶性rchIL-2；4)在不溶性chIL-2纯化工艺方面,通过对包涵体洗涤条件、包涵体裂解条件、纯化填料、pH值和载量的优化,证明应用Ni2+亲和层析柱在2M尿素和3000rpm离心洗涤包涵体、pH8.0的6M盐酸胍缓冲液裂解包涵体、小体积上样(2.4ml上样体积)、pH 6.3的6M盐酸胍缓冲液洗脱杂蛋白及250mM咪唑洗脱目的蛋白的条件下可获得37mg/LchIL-2；5)利用接有Superdex 75凝胶预装柱的AKTA UPC纯化系统,从纯化的可溶性rchIL-2蛋白中成功分离到鸡IL-2蛋白单体和二聚体,其产量分别为1mg/L和0.25mg/L.分别采用透析法和稀释法对变性纯化的鸡IL-2蛋白进行复性,ANS疏水探针测定不同条件复性产物的疏水性,在此基础上利用体外T淋巴细胞增殖实验和CCK-8比色法测定不同条件复性产物的生物学活性。复性结果显示,在稀释复性中,pH值、盐酸胍、甘油、PEG6000可以显著提高可溶性rchIL-2的回收率,当复性液pH值维持在8.5并添加3M盐酸胍或10%甘油或0.15%的PEG6000时,稀释复性法中可溶性rchIL-2回收率可达72-80%。与稀释复性法相比,透析复性法的可溶性rchIL-2回收率为31%。生物学活性测定结果显示：GSSG/GSSH终比例为1mM：2.5 mM时,复性产物的生物学活性最好,有氧和硫酸铜条件下的复性产物不具有生物学活性。表现在疏水性方面为：生物活性最好的复性产物,它的疏水值为352。将变性纯化的rchIL-2分别在使二硫键断开的10nM DTT还原条件下和保留二硫键的GSSG/GSSH氧化还原条件下进行复性,体外生物学活性和疏水性检测结果显示：处于保留二硫键状态的复性rchIL-2疏水性低、具有有良好的生物学活性,而处于二硫键断裂状态的复性rchIL-2疏水性高、生物学活性丧失。证明chIL-2分子内的二硫键对于维持其生物学活性是必需的。