【摘 要】
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目的:了解芜湖地区新生儿和孕妇的弓形虫感染情况和特点。并基于环介导等温扩增技术（Loop mediated isothermal amplification,LAMP）和重组酶介导的等温扩增结合横向流动试纸条技术（Recombinase-Aid Amplification-Lateral flow dipstick,RAA-LFD）建立可快速检测弓形虫的方法,验证建立的LAMP和RAA-LFD方法
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目的:了解芜湖地区新生儿和孕妇的弓形虫感染情况和特点。并基于环介导等温扩增技术（Loop mediated isothermal amplification,LAMP）和重组酶介导的等温扩增结合横向流动试纸条技术（Recombinase-Aid Amplification-Lateral flow dipstick,RAA-LFD）建立可快速检测弓形虫的方法,验证建立的LAMP和RAA-LFD方法的敏感性和特异性,旨在为临床弓形虫病的快速诊断提供一定的实验依据。方法:对芜湖地区新生儿和孕妇采用电化学发光法进行弓形虫感染的血清学调查。进一步根据弓形虫529 bp基因重复序列,分别设计并筛选出最佳LAMP引物和RAA-LFD引物和探针;优化反应体系和反应条件;以弓形虫529 bp基因阳性重组质粒标准品为模板梯度稀释后进行敏感性检测;以人血液、间日疟原虫、人蛔虫、旋毛虫、日本血吸虫、双线绦虫、猪带绦虫、大片吸虫和结肠内阿米巴原虫基因组DNA为模板进行特异性检测;最后用建立的LAMP和RAA-LFD方法进一步检测临床血液样本,比较其与电化学发光法（ECL）、荧光定量PCR（qPCR）法的检出率和一致性。结果:（1）芜湖地区新生儿弓形虫IgM抗体阳性率为0.06%（2/3371）,弓形虫IgG抗体阳性率为13.02%（439/3371）,不同性别新生儿TOX-IgG阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）;其中早产儿与健康对照者血清TOX-IgG阳性率比较差异有统计学意义（P<0.05）。孕妇弓形虫IgM抗体阳性率为0.14%（2/1443）,弓形虫IgG抗体阳性率为5.96%（86/1443）,不同年龄组中孕妇TOX-IgG阳性率差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）针对弓形虫529 bp基因的LAMP检测方法,在最佳反应温度67℃条件下,30min内即可检测到弓形虫,建立的弓形虫质粒检测限为1.0×10-5ng/μL;并且与人血液、间日疟原虫、人蛔虫、旋毛虫、日本血吸虫、双线绦虫、猪带绦虫、大片吸虫和结肠内阿米巴原虫无交叉反应。（3）针对弓形虫529 bp基因建立的RAA-LFD方法,筛选出的最佳引物和探针组合在引物用量为240pmol/L、在39℃条件下、反应扩增时间30min时效果最佳,建立的弓形虫质粒检测限为1.0×10-5ng/μL;并且与人血液、间日疟原虫、人蛔虫、旋毛虫、日本血吸虫、双线绦虫、猪带绦虫、大片吸虫和结肠内阿米巴原虫无交叉反应。（4）ECL（IgM）、qPCR、LAMP和RAA-LFD四种方法检测临床样本的阳性率分别为1.12%、1.50%、1.50%、1.50%,qPCR、LAMP和RAA-LFD检出率一致;比较四种检测方法的一致性,发现ECL与qPCR、LAMP和RAA-LFD四种方法检测结果样本均阴性的符合率为85.77%（229/267）。结论:本次调查发现芜湖地区新生儿和孕妇存在一定的弓形虫感染,且早产儿与弓形虫感染有关;本研究建立的检测弓形虫LAMP和RAA-LFD方法简便、快速、敏感、特异,且与ECL、qPCR方法检测结果符合率较高,适合用于临床血液样本弓形虫的快速检测。
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