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背景弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的一种侵袭性淋巴瘤，其治疗和预后在过去10年取得了巨大的进步。虽然DLBCL有很多亚型，但其共同点就是肿瘤细胞高度表达CD20抗原。抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗的出现被认为是B细胞淋巴瘤治疗上的一个重大突破。大量临床试验证实，利妥昔单抗联合CHOP的免疫化疗方案（R-CHOP）明显提高了DLBCL患者的缓解率和生存率。因此2003年NCCN治疗指南将R-CHOP方案作为DLBCL的一线标准治疗方案。然而，对于部分患者，利妥昔单抗的应用并没有增加CHOP方案的疗效，而是表现出耐药、早期或晚期复发。研究显示，钙通道和泵与肿瘤的发生、发展关系密切，钙离子传导通路在利妥昔单抗相关的细胞凋亡中也起重要作用，因为在被利妥昔单抗杀死的细胞中发现细胞内钙的增高。基因芯片分析发现，在对免疫化疗不同反应的患者中，存在钙通道蛋白CACNA1C的差异性表达，因此钙通道蛋白与免疫化疗疗效的关系值得深入研究。目的明确CACNA1C与DLBCL患者免疫化疗疗效的关系，寻找提高其疗效的方法。材料与方法选取2007-2012年郑州大学附属肿瘤医院R-CHOP方案初治的DLBCL患者111例，收集临床资料和病理科存档的石蜡组织，根据疗效，将其分为敏感组和耐药组。选取DLBCL两种细胞株OCI-Ly7和OCI-Ly3，其中OCI-Ly7是对利妥昔单抗敏感的细胞系，OCI-Ly3是对利妥昔单抗耐药的细胞系。1临床研究部分选取DLBCL患者48例用来做预实验基因芯片，基因表达谱结果分析，在耐药组和敏感组中，钙通道基因存在差异性表达，其中CACNA1C差异性较明显，CD20表达无明显差异。再选取DLBCL患者63例，敏感组41例，耐药组22例。从石蜡组织中提取RNA，应用qRT-PCR方法检测患者基因CACNA1C的表达量。应用免疫组化的方法分别检测患者中CACNA1C和CD20的表达量。2基础研究部分2.1应用CCK-8法分别检测利妥昔单抗、表阿霉素作用于两种细胞株细胞增殖的情况。筛选出药物的最佳作用浓度，为后期药物实验提供依据。2.2分别应用qRT-PCR和Western Blot方法检测两种细胞株中CACNA1C基因和蛋白的表达量。2.3利用Indo1-AM流式细胞仪检测利妥昔单抗加或不加钙通道阻滞剂尼莫地平作用于两种细胞系，钙离子内流情况。2.4Annexin V-FITC流式检测利妥昔单抗和表阿霉素作用于两种细胞株的凋亡率，以及尼莫地平对细胞凋亡的影响。3统计学方法实验结果所用到的统计分析均采用SPSS13.0统计软件。免疫组化实验结果用平均值±标准差（x s)来表示，分别检验其正态性、方差齐性，采用t检验来比较差异。结果1. CACNA1C基因在敏感组患者中表达量高于耐药组，差异有统计学意义（p=0.025）。CACNA1C蛋白在耐药组患者中表达阳性率较敏感组低（10/22vs31/41, p=0.021），CD20在两组中表达无明显差异。2.利妥昔单抗和表阿霉素分别作用两种细胞株后，细胞增殖抑制率均呈浓度依赖性，和时间相关性不大，最佳作用浓度分别为利妥昔单抗50μg/ml，表阿霉素浓度50ng/ml。3.在对利妥昔单抗敏感的细胞株OCI-Ly7中，CACNA1C基因的表达量明显高于对利妥昔单抗耐药的OCI-Ly3细胞株(19.617±1.627vs5.230±0.120,p=0.001)。 Western blot发现钙通道蛋白CACNA1C在OCI-LY3细胞上的表达明显低于OCI-Ly7细胞。4.利妥昔单抗联合Fab抗体后能诱导两种细胞株的钙内流，且钙内流的强度能显著地被尼莫地平所抑制，对OCI-Ly7细胞的抑制强度明显强于OCI-Ly3细胞。5.利妥昔单抗处理两种细胞株48h，OCI-Ly7细胞较之OCI-Ly3细胞有较高的凋亡率；经利妥昔单抗联合表阿霉素处理48h后，尼莫地平能显著降低两种细胞株的凋亡：OCI-Ly7(31.96±5.12vs19.53±5.48, p=0.031)和OCI-Ly3(11.27±5.04vs5.30±2.87, p=0.045)。结论1. CACNA1C与DLBCL免疫化疗疗效呈正相关，其低表达导致耐药。2.利妥昔单抗介导钙离子内流引起细胞凋亡，增加了化疗疗效，CACNA1C特异性阻滞剂减少利妥昔单抗介导的细胞凋亡，从而导致耐药。