野木瓜是一种具有良好镇痛作用的传统药物,由野木瓜制成的野木瓜注射液和野木瓜片剂已广泛应用于临床。有研究发现野木瓜的主要成分野木瓜五环三萜皂苷（pentacyclic triterpenoid saponin,PTS）提取物可以抑制辣椒素诱导的TRPV1受体电流,说明野木瓜PTS提取物对TRPV1通道的调控可能是野木瓜产生镇痛作用的原因。同TRPV1通道相似的酸敏感离子通道（Acid-sensing ion channels,ASICs）也是痛觉信号的传递重要途径之一,其不仅参与痛觉传递过程,还参与味觉,痒觉等信号传递。因此,我们猜测野木瓜PTS提取物可能也能够调控ASICs。本课题以ASICs为靶点,探究野木瓜PTS提取物在痛觉和痒觉传导过程中对ASICs的调控作用,以及起关键调控作用的野木瓜PTS活性成分。应用全细胞膜片钳技术,观察了不同浓度野木瓜PTS提取物对p H5.0溶液诱发的大鼠DRG神经元细胞ASICs电流峰值的影响。结果显示,浓度为20μg/m L,100μg/m L,500μg/m L的野木瓜PTS提取物对ASICs电流峰值有抑制作用,且500μg/m L的抑制效果显著。在动物疼痛模型中,发现野木瓜PTS提取物(20 mg·kg-1)对1%冰醋酸诱发的小鼠急性炎性痛有镇痛效果,ASICs的激动剂2-胍-4-甲基喹唑啉（2-guanidine-4-methylquinazolin,GMQ）（10 m M）能够对抗野木瓜PTS提取物的部分镇痛作用;野木瓜PTS提取物(20 mg·kg-1)对完全弗氏佐剂（Complete Freund’s adjuvant,CFA）诱导的慢性炎性痛也有镇痛作用;通过免疫荧光技术,发现野木瓜PTS提取物还能下调DRG细胞ASIC3蛋白表达,说明野木瓜PTS提取物可以通过调控ASICs产生镇痛效果。在丙酮/二乙醚/水（acetone/diethylether and water,AEW）诱导的小鼠干皮症模型中,野木瓜PTS提取物(20 mg·kg-1)可以显著降低小鼠的抓挠次数,缓解慢性瘙痒症状,同时能降低慢性瘙痒动物血清中炎性因子（IL-1β,IL-6,TNF-α）的表达。综上所述,野木瓜PTS提取物能够通过调控大鼠DRG神经元中ASICs电流,阻滞痛觉和痒觉信号传递,达到镇痛止痒的效果。为了进一步阐明野木瓜PTS提取物调控ASICs的关键活性成分,我们对野木瓜PTS提取物中含量较高,化学结构已知的8个单体成分进行了研究。采取反向筛选方式,先观察8种成分的联合效应,再逐一递去掉某一种成分,通过比较去掉一种成分的7种成分组合和原8种成分组合的药理效应,将能够逆转原8种成分组合药理效应的关键活性成分筛选出来。运用全细胞膜片钳技术,观察了野木瓜PTS提取物成分组合对ASICs电流的影响。结果显示,与8种单体组合的药理效应相比,在分别去除YF-33和YF-49后,剩下的7种单体的组合丧失了对ASICs电流的抑制作用。因此,我们推测中YF-33和YF-49两种单体可能是野木瓜PTS提取物调控ASICs电流,起到止痛止痒效应的关键活性成分。采用全细胞膜片钳技术,观察了不同浓度的YF-33和YF-49对ASICs电流的影响。实验结果表明,YF-33和YF-49可以浓度依赖地抑制ASICs电流,其半数抑制浓度分别为0.15036±0.0342μM和0.18051±0.0631μM。在动物疼痛模型实验中,YF-33（15μM）和YF-49（18μM）对冰醋酸引起的急性炎性痛具有显著镇痛效果,GMQ（10 m M）能够对抗YF-33和YF-49的部分镇痛作用;在慢性瘙痒模型中,YF-33（15μM）和YF-49（18μM）可以显著减少动物的抓挠次数,降低动物血清中的炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α的浓度。综合上述实验结果分析,野木瓜PTS提取物能够通过抑制DRG神经元中ASICs电流,下调ASIC3蛋白表达,阻滞痛觉和痒觉信号的传导,进而起到镇痛止痒作用。其中,YF-33和YF-49两种单体应该是野木瓜PTS提取物通过调控ASICs镇痛止痒的关键活性成分。