【摘 要】
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目的:慢性肾脏疾病（chronic kidney disease,CKD）在老年人群中有较高的发病率,肾脏纤维化是许多慢性肾脏疾病进展到终末阶段的重要病理过程。神经生长因子诱导的基因B（nerve growth factor-induced gene B,Nur77）属于核激素受体的NR4A亚类,对于多种衰老相关疾病的发生具有重要作用,但在老年肾脏纤维化中的作用机制尚不明确。因此,本课题探讨了Nu
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目的:慢性肾脏疾病（chronic kidney disease,CKD）在老年人群中有较高的发病率,肾脏纤维化是许多慢性肾脏疾病进展到终末阶段的重要病理过程。神经生长因子诱导的基因B（nerve growth factor-induced gene B,Nur77）属于核激素受体的NR4A亚类,对于多种衰老相关疾病的发生具有重要作用,但在老年肾脏纤维化中的作用机制尚不明确。因此,本课题探讨了Nur77在老年肾脏纤维化疾病中的作用机制。方法:本课题利用5月龄年轻及20月龄自然衰老WT和Nur77-/-小鼠模型,分为四组,每组10只,自由喂养,代谢笼收集24 h尿液并检测尿量（urine volume,UV）,尿白蛋白（urinary albumin,ALB）,检测小鼠血清生化指标血肌酐（serum creatinine,SCr）,血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）,转化生长因子β（transforming growth factor,TGFβ）等指标;采用H&E、MASSON染色观察小鼠肾脏组织的形态变化及纤维化程度;同时体外实验,构建Nur77过表达及敲低的稳转细胞系,利用肾小管上皮细胞给予10 ug/m L TGFβ刺激24 h模拟肾脏纤维化的细胞模型,采用免疫蛋白印迹实验分析细胞及肾脏组织Smad2/3,磷酸化Smad2/3（phosphor-Smad2/3,P-Smad2/3）,I型胶原蛋白（collagen I,Col I）,以及α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin-positive,α-SMA）的蛋白表达,RT-PCR检测细胞及肾脏组织Collagen I,ACTA2的m RNA表达。结果:随年龄增长,小鼠肾脏功能下降,且与老年WT小鼠相比,老年Nur77-/-小鼠肾功能明显明显下降（p<0.01）,ALB、SCr、BUN增加,UV、内生肌酐清除率（creatinine clearance rate,CCr）降低;肾脏H&E、MASSON结果显示,与5月龄Nur77-/-小鼠相比,20月龄老年Nur77-/-小鼠肾脏出现退行性病变,肾小球体积增大,Bowman囊增厚,肾小管萎缩,管状细胞肿胀,肾小管损伤指数增加,肾脏纤维化水平增加;免疫蛋白印迹分析,20月龄老年Nur77-/-小鼠与20月龄WT小鼠相比,肾脏组织P-Smad2/3升高（p<0.01）,总Smad2/3蛋白变化不明显,纤维化相关蛋白Collagen I、α-SMA的表达升高（p<0.01）;HK2细胞上给予TGFβ刺激后,P-Smad2/3升高（p<0.01）,纤维化相关蛋白Collagen I、α-SMA的表达升高（p<0.01）,Collagen I,ACTA2的m RNA水平也明显升高（p<0.01）,在Nur77敲减之后,P-Smad2/3显著升高,但总Smad2/3蛋白变化不明显,同时Collagen I、α-SMA的蛋白表达更多、转录水平的Collagen I和ACTA2表达也显著增加,且具有统计学差异（p<0.01）,相反,在过表达Nur77后,P-Smad2/3被抑制,下调了Collagen I、α-SMA的蛋白和m RNA的表达。结论:本课题证明老年小鼠肾脏形态异常,肾脏功能下降;Nur77敲除加速老年小鼠肾脏纤维化的进程;其作用机制为Nur77通过抑制TGFβ/Smads信号通路,保护衰老性肾脏功能下降和肾脏纤维化。
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