Kazrin F促进宫颈癌细胞恶性行为的研究

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目的:  Kazrin蛋白最早于2004年由Karen R. Groot及其同事发现,他们发现了它的四个异构体kazrin A,kazrin B,kazrin C,kazrin D(kazrin C和kazrin D的氨基酸序列相同),并证明它与细胞连接相关。之后,陆续有关于kazrin的研究,发现它与小鼠和非洲爪蟾蜍的胚胎发育相关。2009年,Rachida Nachat发现了kazrin的另一个异构体 kazrinE,并证明其与微管连接,与桥粒形成和表皮分化相关。同年,本实验室发现了另一个新的异构体kazrin F,具有抗细胞凋亡作用。本课题拟在实验室前期工作的基础上,研究kazrin F对宫颈癌(cervical cancer)细胞某些恶性行为的影响,并阐明机制。宫颈癌在世界范围内是女性发病率和死亡率较高的一类癌症,尤其在发展中国家。通过本篇研究,我们试图将kazrin F作为宫颈癌诊断和治疗的一个新的靶标。  方法:  首先应用qRT-PCR检测宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中kazrin F的表达水平,初步预测kazrin F对肿瘤发生的可能作用。之后我们在宫颈癌细胞HeLa中过表达或敲降kazrin F,运用MTT实验,平板克隆形成实验,transwell迁移和侵袭实验,检测kazrin F对宫颈癌细胞生长、增殖能力、迁移能力和侵袭能力的影响。之后我们用流式细胞术(FACS)检测了kazrin F对宫颈癌细胞凋亡和细胞周期进程的影响,以阐明kazrin F影响细胞生长和增殖能力的机制。Western blot检测kazrin F对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响,阐明kazrin F影响细胞迁移和侵袭能力的机制。最后,我们用荧光显微观察和western blot实验检测了kazrin F对宫颈癌细胞自噬水平的影响。  结果:  qRT-PCR检测发现宫颈癌组织相对于癌旁正常组织 kazrin F高表达。验证kazrin F过表达及敲降质粒有效后,MTT检测发现kazrin F能增强宫颈癌细胞活性;平板克隆形成实验证明kazrin F能促进宫颈癌细胞生长增殖能力;transwell迁移实验和侵袭实验证实kazrin F能促进宫颈癌细胞迁移和侵袭能力。流式细胞术检测发现kazrin F能抑制宫颈癌细胞中紫杉醇诱导的凋亡,促进宫颈癌细胞周期进程。Western blot分别检测上皮标记物和间充质标记物,发现kazrin F能促进宫颈癌细胞上皮间质转化。最后,荧光显微观察和western blot检测分别证实kazrin F能提高宫颈癌细胞外源性和内源性LC3-II水平,促进宫颈癌细胞自噬。  结论:  以上实验结果证明kazrin F通过调节细胞周期进程、细胞凋亡、EMT和自噬促进宫颈癌细胞生长、增殖、迁移和侵袭,在宫颈癌细胞中发挥促癌作用。它可能作为一种新的生物标记物对宫颈癌的诊断和治疗具有潜在应用价值。
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