论文部分内容阅读
研究背景及目的：最新研究表明：肿瘤酸性微环境与肿瘤耐药密切相关。用于治疗酸相关疾病的质子泵抑制剂（proton pump inhibitors，PPIs）一方面通过抑制了空泡型质子泵（V-ATPase）的活性调节肿瘤细胞的PH梯度，逆转肿瘤酸性微环境；另一方面抑制肿瘤细胞自噬、促进其凋亡；从而提高化疗药物的敏感性。本研究探讨V-ATPase非特异性抑制剂艾司奥美拉唑（esomeprazole,EMSO）对上皮性卵巢癌紫杉醇耐药的逆转作用及其作用机制。 方法：免疫组织化学法检测上皮性卵巢癌组织及正常卵巢组织空泡型质子泵(V-ATPase)蛋白表达；EMSO、紫杉醇（Paclitaxel，Taxol）单独及EMSO联合Taxol作用上皮性卵巢癌敏感株A2780及耐药株A2780/T细胞:MTT及流式细胞仪检测细胞生存率和细胞凋亡；BCECF-AM、Caspase-3分光光度法、免疫荧光显微镜分别检测细胞内PH值、Caspase-3活性和GFP-LC3荧光斑分布；Real Time-PCR及Western Blot分别检测细胞内自噬、耐药相关基因及蛋白的表达。 结果：相比于正常卵巢组织，上皮性卵巢癌组织过表达V-ATPase，尤以胞浆高表达为主；与紫杉醇敏感细胞A2780比较，紫杉醇耐药细胞A2780/T具有胞内PH值高而胞外PH值低的现象、V-ATPase高表达、自噬发生及对紫杉醇耐药等特点。与单用紫杉醇相比，联合EMSO可显著抑制A2780/T细胞增殖，促进细胞凋亡，且这种凋亡与Caspase-3通路无关；抑制细胞自噬，逆转细胞内外PH梯度和细胞耐药表型(p＜0.05)。 结论：上皮性卵巢癌细胞增殖过程中产生肿瘤酸化现象；化学治疗药物诱导细胞保护性自噬；EMSO通过抑制V-ATPase部分逆转上皮性卵巢癌酸性微环境，阻止肿瘤细胞保护性自噬并促进细胞凋亡，从而恢复卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性。