靶向Tie2的siRNA联合卡铂对子宫内膜癌裸鼠移植瘤作用的研究

来源 :东南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dzluzd2009
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背景及目的:目前在抗癌研究中,通过阻断肿瘤血管生成来治疗肿瘤已经成为肿瘤治疗领域的最有前景的途径之一。本研究主要观察Tie2 siRNA联合卡铂对子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作作用。  方法:应用扩增培养的Ishikawa细胞株建立子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。待肿瘤体积达到50mm3(约造模后2周)后,随机将25只荷瘤裸鼠分为5组(每组5只),分别为空白对照组(5%葡萄糖,G组)、阴性质粒组(pRNAT-CMV3.2-Neo-N-siRNA,N组)、卡铂组(伯尔定射液,C组)、Tie2质粒组(pRNAT-CMV3.2-Neo-Tie2-siRNA,T组)、联合组(伯尔定注射液+Tie2-siRNA,A组)。分别应用5%葡萄糖(0.2ml·只-1)、阴性质粒(20ug.只-1)、伯尔定注射液(25.0mg·kg-1,5%葡萄糖溶解稀释)、Tie2质粒(20ug·只-1)和伯尔定注射液(25.0 mg·kg-1)+Tie2质粒(20ug·只-1)瘤体内注射治疗。每3天次,共6次,于最后一次治疗后3天处死所有裸鼠。治疗过中,观察统计移植瘤体积变化,计算抑瘤率;实时定量PCR(real time quantitative Polymerase Chain Reaction,realtime PCR)和Western Blotting方法检测裸鼠移植瘤组织中Tie2 mRNA和蛋白表达。免疫组织化学技术利用CD34抗体测定肿瘤微血管密度(Tumor microvessel density,MVD),分析每组肿瘤组织中的肿瘤血管抑制情况。  结果:子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤体积达到50mm3大约需要10-14天的时间。G组、N组、C组、T组及A组五组最后的肿瘤体积分别为(905.05±74.84)mm3、(937.65±103.09)mm3、(312.99±59.50)mm3、(384.77±76.71)mm3、(66.11±21.81)mm3。与G组和N组相比,C组、T组及A组的肿瘤生长明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。与G组相比,C组、T组及A组的平均抑瘤率分别为(65.28±6.46)%、(56.95±10.85)%、(92.61±2.54)%,且C组、T组及A组中 Tie2 mRNA和蛋白的表达水水平明显降低(P<0.05)。微血管密度分析显示,C组、T组及A组的肿瘤血管数量明显比G组和N组少,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:靶向Tie2的siRNA可有效沉默Tie2的表达,显著抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长,并降低肿瘤组织中Tie2基因的表达。Tie2-siRNA与卡铂联合应用具有协同作用,可提高卡铂的抗肿瘤效果,并且可能通过破坏肿瘤细胞存在的微环境,促使肿瘤细胞凋亡增加,并将肿瘤组织中紊乱、渗漏、扭曲的肿瘤血管正常化,从而利于卡铂的吸收,增强卡铂化疗的敏感性;或者两者联合阻断了更多其它利于癌症发生发展的途径而起到协同作用。
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