【摘 要】
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背景:沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,CT)是性传播疾病中最常见的病原体之一,目前在我国CT引起的生殖道感染的发病率达4.7%。CT感染导致的不孕问题日益严峻,明确其感染后宿主细胞的病理改变对降低不孕的发生至关重要。有研究发现,CT感染后引起的宿主免疫反应可引起宿主细胞中IL-1β(白介素1-β)、caspase-1(天冬氨酸蛋白水解酶-1)、caspase-4/11、IFN
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背景:沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,CT)是性传播疾病中最常见的病原体之一,目前在我国CT引起的生殖道感染的发病率达4.7%。CT感染导致的不孕问题日益严峻,明确其感染后宿主细胞的病理改变对降低不孕的发生至关重要。有研究发现,CT感染后引起的宿主免疫反应可引起宿主细胞中IL-1β(白介素1-β)、caspase-1(天冬氨酸蛋白水解酶-1)、caspase-4/11、IFN-1β的表达增加,这些炎症因子同时也在细胞焦亡中发挥了重要的作用。并且在衣原体的其他型如肺型中有研究证实衣原体感染会导致宿主细胞发生焦亡。由此我们猜测,CT感染宿主细胞后,会引起宿主细胞发生细胞焦亡。而cGAS-STING信号通路作为炎症感染中重要的炎症因子产生通路,我们的前期研究发现感染了 CT的HeLa细胞中,STING的表达升高。CT感染后的宫颈上皮细胞是否发生焦亡以及STING信号通路与细胞焦亡的发生关系尚不可知。综上,我们提出假设:CT感染后的宫颈上皮细胞可通过cGAS-STING信号通路调控宿主细胞发生焦亡。本研究通过建立CT感染的细胞模型,检测cGAS-STING信号通路因子及细胞焦亡因子的表达情况,接着采用STING激动剂及抑制剂进一步明确CT感染时细胞是否可通过STING信号通路发生细胞焦亡,从而进一步明确CT感染及其导致的不孕的发生机制,为减少CT感染及降低不孕提供新的思路。目的:众多研究表明CT感染后宿主细胞前期会抑制细胞凋亡的发生以提供沙眼衣原体足够的营养,然而在后期需要促进细胞的死亡以方便CT包涵体的释放。细胞焦亡作为一种炎症性细胞的程序性死亡,符合CT感染后的炎症性死亡,但是其在CT感染方面的报道甚少,本研究拟通过建立CT感染的HeLa细胞模型,明确CT感染后是否发生细胞焦亡,并采用STING的激动剂及抑制剂处理CT感染后的HeLa细胞,以明确宿主细胞的焦亡发生是否受cGAS-STING信号通路的调节,从而进一步明确CT感染及其导致的不孕的发生机制,为减少CT感染及降低不孕提供新的思路。实验方法:采用western blot方法检测CT感染不同时间段STING相关因子(cGAS、STING、IRF3)以及细胞焦亡相关因子(GSDMD、Caspase-1、Caspase-4/11)的表达,RTPCR、PCR、琼脂糖凝胶电泳检测IFN-1β的表达,ELISA检测IL-1β、IL-18、TNF-α的表达,免疫荧光及吉姆萨染色检测CT包涵体形成的情况。使用STING激动剂及抑制剂分别处理CT感染的HeLa细胞,同样方法检测以上因子的表达。实验结果:STING相关因子的表达约在20-32h表达最高,焦亡相关因子的表达约在24-32h表达最高.STING刺激后,除IFN-1β的表达与STING的刺激结果相差较大,STING的其他因子以及焦亡相关因子的表达基本上与STING的表达相一致。STING激动后可促进CT包涵体的形成。结论:1.沙眼衣原体感染HeLa细胞后,HeLa细胞会发生细胞焦亡。2.沙眼衣原体感染HeLa细胞后,细胞焦亡的发生受STING信号通路的调节。
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