【摘 要】
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目的：观察人甲胎蛋白（hAFP）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）双启动子调控的siRNA对Huh-7肝癌细胞生长的影响。方法:将RNA聚合酶Ⅱ重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF-Ⅱ基因的siRNA表
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目的：观察人甲胎蛋白（hAFP）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）双启动子调控的siRNA对Huh-7肝癌细胞生长的影响。方法:将RNA聚合酶Ⅱ重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF-Ⅱ基因的siRNA表达载体（本课题组前期构建）转染Huh-7肝癌细胞和L-02正常肝细胞，采用实时荧光定量PCR检测上述细胞IGF-Ⅱ mRNA表达变化；采用MTS法和流式细胞术检测细胞增殖活性、细胞周期及细胞凋亡变化；采用Western blot检测细胞IGF-Ⅱ基因、细胞增殖相关基因（PCNA）、细胞周期调控相关基因（cyclin E2, cyclin D2, cdc2）及细胞凋亡调控相关基因（Bcl-2）的蛋白水平变化。结果：①实时荧光定量PCR显示，Huh-7肝癌细胞IGF-Ⅱ mRNA表达量显著降低，抑制效率达86%；MTS法结果显示，Huh-7肝癌细胞的增殖受到明显抑制；流式细胞术结果显示，Huh-7肝癌细胞G1期细胞比例显著增加，S期细胞比例显著减少，细胞早期、晚期及总凋亡均显著增加；Western blot结果显示，Huh-7肝癌细胞IGF-Ⅱ、PCNA、cyclin E2、cyclin D2、cdc2及Bcl-2的蛋白表达水平均显著降低。②L-02正常肝细胞上述指标无明显变化。结论：RNA聚合酶Ⅱ重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF-Ⅱ基因的siRNA可特异性抑制肝癌细胞IGF-Ⅱ mRNA表达及生长，这可能与IGF-Ⅱ基因mRNA及蛋白表达水平显著下调后，进而引起细胞增殖相关基因（PCNA）、细胞周期调控相关基因（cyclin E2,cyclin D2, cdc2）及细胞凋亡调控相关基因（Bcl-2）蛋白表达水平显著降低有关，IGF-Ⅱ基因可能成为肝细胞癌基因治疗的一个新靶点。
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