磺胺类药物(sulfonamides, SAs)在临床上主要用于预防和治疗细菌感染性疾病,还常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用。然而过量使用会引起人过敏性反应,且可能有致癌性,因此在动物性食品中残留引起生态环境污染和人类健康危害的潜在威胁已倍受关注,而磺胺二甲基嘧啶(SM2)在磺胺类药物的使用中占有很大比例。因此,研究出一种操作简便、快速、灵敏的测定SAs残留的方法,对于畜产品的安检具有实际意义。本研究在分析磺胺二甲基嘧啶分子结构和免疫原性的基础上,运用单克隆抗体技术生产了单抗,并组装了其免疫学快速检测试剂盒。主要研究结果如下:1.用重氮化方法将SM2偶联于牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA),合成了人工免疫原BSA-SM2和包被抗原OVA-SM2,通过紫外(UV)、SDS-PAGE和免疫小鼠后抗血清的ELISA鉴定,表明BSA-SM2偶联成功,获得了高价、敏感、特异的抗血清。2.用BSA-SM2免疫Balb/C小鼠5只,4次免疫后用间接ELISA和阻断ELISA选择出细胞融合备用小鼠2只,应用细胞融合技术筛选出2H10、2E2、2A10、2G5共4株敏感特异的杂交瘤细胞,用体内诱生腹水法制备SM2 mAb,经鉴定,其间接ELISA效价细胞培养上清分别为1:6.4×102、1:6.4×102、1:3.2×102、1:3.2×102,腹水效价分别为1:1.28×105、1:6.4×104、1:3.2×105、1:2.56×105,其中亲和力最高的2G5株阻断ELISA测定其IC50为5.82ng/ml。3.应用SM2 mAb,依据酶联免疫吸附试验原理,组装了SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒。SM2-Kit的标准曲线呈S型,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625～80μg/L。灵敏度为0.9μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg /L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;本试验制备的SM2-Kit特异性较高,可用于SM2及其同系物的残留检测。试剂盒在4℃可保存6个月。