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目的:检测不同脑胶质瘤细胞系中神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的相对表达水平并筛选本实验理想的实验对象;合成以NRP-1为靶点、t Ly P-1为配体、USPIO为核心的新型磁共振分子探针USPIO-PEG-t Ly P-1并检测其理化性质及生物毒性;检测USPIO-PEG-t Ly P-1同脑胶质瘤细胞的特异性结合能力;观察USPIO-PEG-t Ly P-1同脑胶质瘤细胞结合后在细胞内的分布情况。方法:1传代培养人U87、U251、H4及大鼠C6脑胶质瘤细胞系,以HUVEC为阳性对照、正常大鼠脑组织为阴性对照,利用RT-PCR及Western-Blot从基因及蛋白水平分别检测NRP-1的相对表达水平,利用细胞免疫荧光技术观察NRP-1的亚细胞定位。2利用质谱法验证合成的多肽为试验所需的t Ly P-1(CGNKRTR);电子显微镜观察USPIO的形状及粒径;利用碳二亚胺法合成USPIO-PEG-t Ly P-1,并通过动态光散射法检测其水合粒径;观察USPIO-PEG-t Ly P-1在溶液中的稳定性;利用核磁共振T2map序列检测USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1的横向弛豫时间T2值并计算其倒数R2值;利用MTS比色法检测USPIO-PEG-t Ly P-1的细胞毒性。3利用普鲁士蓝染色法检测不同浓度的USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1与脑胶质瘤细胞系的结合能力;利用核磁共振T2map序列检测不同浓度的USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1与脑胶质瘤细胞结合后的横向弛豫时间T2值并计算其倒数R2值。4利用透射电子显微镜观察USPIO-PEG及USPIO-PEG-t Ly P-1与脑胶质瘤细胞的结合情况,并探索USPIO-PEG-t Ly P-1在脑胶质瘤细胞内的分布情况。结果:1在四种脑胶质瘤细胞系中均有NRP-1的高水平表达,其中浸润能力强、恶性程度相对较高的U87脑胶质瘤细胞系中NRP-1的表达水平最高,差异具有统计学意义。2合成的新型磁共振分子探针USPIO-PEG-t Ly P-1的水合粒径为43.84 nm,在理化性质上符合磁共振分子成像的要求;在磁共振应用的有效浓度范围内(?50μg Fe/ml),USPIO-PEG-t Ly P-1无明显细胞毒性,对细胞存活无显著影响。3普鲁士蓝染色结果显示USPIO-PEG-t Ly P-1较USPIO-PEG具有更强的同U87脑胶质瘤细胞结合的能力,蓝染颗粒更多、更明显;体外磁共振成像结果显示在相同Fe浓度条件下USPIO-PEG-t Ly P-1组U87细胞的R2值高于USPIO-PEG组U87细胞的R2值,差异具有统计学意义。4透射电子显微镜观察结果显示USPIO-PEG-t Ly P-1能够同U87脑胶质瘤细胞特异性结合,并主要分布于内质网、线粒体及溶酶体等细胞器中。结论:本实验合成的以七肽t Ly P-1为配体、USPIO为核心的新型磁共振分子探针USPIO-PEG-t Ly P-1是一种生物安全性好、成像敏感度高的磁共振分子探针。体外实验证实,分子探针USPIO-PEG-t Ly P-1能够靶向结合NRP-1高表达的脑胶质瘤细胞系并产生良好的磁共振T2阴性对比效果,为下一步的动物实验及今后的临床试验奠定了实验基础。