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高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染是诱发宫颈癌的主要病因。为了探讨PCR-测序法在宫颈脱落细胞样品中HPV临床检测方面的应用价值,以及分析HPV16病毒载量和病毒基因组整合状态与宫颈病变程度之间的相关性,利用PCR-测序法比较了四对常用的通用引物对325临床样品中HPV的检出情况,并与FDA批准的第二代杂交捕获方法(HC2)比较评估其临床实用价值;同时对HPV16单一感染的样品,通过real-time PCR测定E2、E6和β-actin三个基因的拷贝数来分析病毒载量和整合状态。
325例临床样品中,245例(75.4%)为HPV阳性,其中87例(26.8%)为混合感染。共发现36个不同的HPV型别,HPV16所占的比例最高,其次是HPV58和52。高危型HPV检出率随病变程度加重显著性增加,但混合感染的比例呈下降趋势。在21~30岁年龄组,总体HPV及高危型HPV感染率均最高。四对通用引物对HPV的检测一致性较好(kappa=0.751~0.929),但MGP和PGMY09/11检测混合感染的能力更强一些。每对引物都可以检出较多的HPV型别,但对个别型别存在偏好性,具体表现为GP5+/6+和MGP更容易检出HPV90,而MY09/11和PGMY09/11可检出更多样品感染HPV53。PCR.测序法与HC2对高危性HPV检测的符合度较好(kappa=0.675)。
利用四对通用引物检测皆为HPV16单一感染的样品45例,校正后的病毒载量在正常组、宫颈低度鳞状上皮内病变(LSIL)、宫颈高度鳞状上皮内病变(HSIL)和宫颈鳞癌(SCC)的中位数分别是1.48、20.77、19.72和4.59 copies/cell。癌前病变组(LSIL和HSIL)病毒载量显著高于正常组和SCC。随着病变程度的升高,E2/E6呈下降的趋势;2例HPV16基因组完全整合的样品仅见于SCC组。
PCR-测序法可有效地对宫颈脱落细胞样品进行HPV检测和基因分型,对大规模的HPV筛查具有潜在的应用价值。HPV16病毒载量在不同宫颈病变中存在差异,可作为预测HPV16感染后宫颈病变进展的标志物。