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本文对人类肿瘤基因FP248和多聚组氨酸融合乙肝抗原SS1在毕赤氏酵母中的表达分两部分进行研究:
第一部分:FP248是一个新发现的人类肿瘤相关基因。本文使用毕赤氏酵母胞内表达载体pPIC3.5k对FP248进行了克隆及表达。实验结果表明,FP248能够在毕赤氏酵母GS115胞内得到表达,只是其表达量偏低并且呈不溶的包涵体形式。为便于纯化,我们采取了优化其基因序列编码子以及去除起始密码子前的polyA结构以观察其对表达水平的影响。同时对发酵诱导条件进行了一系列的优化措施,在没有得到可溶性蛋白的情况下,使包涵体蛋白的表达量尽量提高。另外,最后对酵母包涵体的洗涤,变性,复性等作了一定的研究工作,以期为毕赤氏酵母表达系统的深入研究起到一定的指导作用。
第二部分:乙肝重组抗原SpreS1(简称SS1抗原)较S抗原有更强的免疫原性,可望有更好的临床应用前景。为了便于表达产物的纯化,本文研究了利用化学合成的寡聚核苷酸链和PCR扩增,在SS1基因的5’端和3’端分别融合了6His-EK和6His的编码序列,将其重组质粒pPIC3.5k-6His-EK-SS1、pPIC3.5k-SS1-6His转化导入毕赤氏酵母菌GS115中,筛选鉴定得到的重组酵母工程菌进行诱导培养,然后采用镍离子柱(Ni-NTABasin)纯化表达产物,纯化的蛋白样品经ELISA效价测定、SDS-PAGE胶和WesternBlot分析,结果表明融合抗原6His-EK-SS1和SS1-6His在毕赤氏酵母中均能表达,纯化的产物仍有免疫原性,所用的纯化方法简便有效。