【摘 要】
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钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可或缺的蛋白，执行着非常广泛而重要的功能。本研究在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上，利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66kDa
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钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可或缺的蛋白，执行着非常广泛而重要的功能。本研究在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上，利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66kDa钙结合蛋白(SjIrV1)编码基因的cDNA序列，BLAST分析与菲律宾株日本血吸虫SjIrV1cDNA编码序列一致，荧光定量PCR分析表明该基因在童虫和成虫期不同发育阶段均有表达，其中在35d和42d成虫中表达量较高，在42d雌虫中该基因表达水平远高于42d雄虫。构建重组表达质粒pET28a(+)-SjIrV1，在大肠杆菌中成功诱导表达，重组蛋白主要以可溶性形式存在，通过高效液相色谱法(RP-HPLC)以及串联质谱法(MS/MS)鉴定所获蛋白为目的蛋白SjIrV1。蛋白质印迹（Westernblotting）分析结果显示重组蛋白能被感染日本血吸虫鼠血清和免疫鼠血清所识别，sjIrV1蛋白在虫体各发育阶段中均表达。免疫荧光染色实验观察表明SjIrV1主要分布在日本血吸虫成虫的表膜。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后，免疫鼠血清中检测到较高水平的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体，且IgG1/IgG2a比值呈下降趋势，同时诱导小鼠产生较高滴度的IL-12p70和IFN-γ细胞因子，说明rsjIrV1免疫小鼠后诱导了Th1/Th2混合型免疫应答，但以Th1型占主导。动物保护实验结果表明，rSjIrV1诱导小鼠产生12.25％的减虫率和34.07％的肝脏减卵率。本研究结果提示，SjIrV1可能在日本血吸虫的生长发育过程中起着重要作用。
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