管花肉苁蓉中多糖提取分离纯化及体外免疫活性研究

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目的:建立管花肉苁蓉药渣中多糖的最佳提取工艺,考察不同极性的大孔吸附树脂对管花肉苁蓉水提物中多糖的脱色,脱蛋白作用,筛选最佳大孔吸附树脂并建立脱色工艺。DEAE-650M填料分离管花肉苁蓉水提物中各多糖组分,比较各组分抗氧化活性及体外免疫活性。方法:通过单因素实验,正交实验优化多糖提取工艺;采用静态吸附法筛选出具有最佳分离效果的树脂,结合动态洗脱法,研究影响分离效果的主要因素,得出最佳分离工艺。根据各多糖分子所携带基团的差异,用DEAE-650M填料分离出中性多糖,酸性多糖,并研究多糖对管花肉苁蓉体外清除DPPH自由基,羟自由基以及对金属离子还原能力,并与阳性对照药物(Vc)进行对照;研究各多糖干预对巨噬细胞RAW264.7增殖水平,对一氧化氮,肿瘤坏死因子及白细胞介素等炎症因子分泌量的变化。结果:热浸提法提取管花肉苁蓉药渣中多糖的最佳条件:提取温度90℃,提取时间2h,料液比1∶50;此条件下的多糖提取率为5.68%。筛选结果发现AB-8大孔吸附树脂对管花肉苁蓉水提物的脱色和除蛋白效果较好,脱色的最佳工艺:上样浓度25mg/ml,吸附时间12h,最佳流速1.2BV/h。抗氧化实验发现,管花肉苁蓉多糖对自由基有较强的清除能力,对铜离子有较强的还原能力。在体外免疫活性研究实验中发现,分离纯化后的各多糖组分都具有一定的调节免疫活性的能力,其中酸性多糖CT2调节能力较强。结论:热水浸提多糖的方法简便易行,节能环保,成本低,且多糖化学不易被破坏;AB-8大孔吸附树脂对新疆管花肉苁蓉水提物中的多糖有较好的分离效果,易操作,安全且可重复利用。DEAE-650M离子交换柱填料亦适合用于管花肉苁蓉多糖的分离纯化,分离纯化后的管花肉苁蓉多糖与粗多糖相比,具有更强的抗炎活性,抗氧化活性,便于在新疆管花肉苁蓉多糖的制备中推广使用并为研制出管花肉苁蓉多糖产品奠定基础。
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