【摘 要】
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目的:多项研究表明,野生鸟类携带多种病原微生物,对禽流感而言野鸟的迁徙以及市场活禽的交易促进了不同地域、不同禽类、不同亚型流感病毒的相互重组。对艾比湖湿地自然保护区野生鸟类禽流感病毒的检测对新疆地区的畜牧业、疫病防制起到预警作用。方法:本研究对采集自新疆艾比湖自然保护区野鸟的粪便棉拭子上清液使用禽流感特异性引物M229对样品做禽流感病毒的检测,对禽流感阳性样品使用HA通用引物进行PCR扩增、测序、
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目的:多项研究表明,野生鸟类携带多种病原微生物,对禽流感而言野鸟的迁徙以及市场活禽的交易促进了不同地域、不同禽类、不同亚型流感病毒的相互重组。对艾比湖湿地自然保护区野生鸟类禽流感病毒的检测对新疆地区的畜牧业、疫病防制起到预警作用。方法:本研究对采集自新疆艾比湖自然保护区野鸟的粪便棉拭子上清液使用禽流感特异性引物M229对样品做禽流感病毒的检测,对禽流感阳性样品使用HA通用引物进行PCR扩增、测序、分析。序列分析后使用9日龄的普通鸡胚进行禽流感病毒的分离,对分离得到的鸡胚尿囊液使用禽流感病毒通用引物对病毒的基因型进行鉴定;又对分离株的血凝素和神经氨酸酶的生物信息学信息进行了预测分析并对这两株毒株的全基因组序列进行分析。获得病毒后分别对分离毒株进行了全基因组序列扩增,连接T载体后转化至DH5α感受态细胞中,涂布平板后挑取单个菌落摇菌、测序;最后分别感染雌性balb/c小鼠以及四周龄无免疫鸡,观察、测定分离株致病力。结果:本研究共采集样品拭子80份,检测到禽流感阳性率为18.75%,分离出两株代表性低致病性禽流感病毒,分别命名为A/Wide Bird/Ebinur Lake/40/2017（H1N2）和A/Wide Bird/Ebinur Lake/47/2017（H3N8）。分离株的血凝素裂解位点都不包含有任何一种连续碱性氨基酸,并且都符合低致病禽流感氨基酸序列的特点。分离株的血凝素与神经氨酸酶均具有亲水性。A/Wide Bird/Ebinur Lake/40/2017（H1N2）血凝素蛋白信号肽剪切位点为SKA-DT,连续氨基酸数量超过10个的B细胞抗原表位共12个,具有25个抗原决定簇和59个肽段。A/Wide Bird/Ebinur Lake/40/2017（H1N2）神经氨酸酶连续氨基酸数量超过10个的B细胞抗原表位共9个,具有15个抗原决定簇和55个肽段。A/Wide Bird/Ebinur Lake/47/2017（H3N8）血凝素蛋白信号肽剪切位点为AFS-QD,连续氨基酸数量超过10个的B细胞抗原表位共12个,具有17个抗原决定簇和51个肽段。A/Wide Bird/Ebinur Lake/47/2017（H3N8）神经氨酸酶连续氨基酸数量超过10个的B细胞抗原表位共9个,具有16个抗原决定簇和46个肽段。两株分离株均可以在雌性balb/c小鼠以及四周龄无免疫鸡体内进行复制,且对雌性balb/c小鼠以及四周龄无免疫鸡均无致死作用,A/Wide Bird/Ebinur Lake/40/2017（H1N2）静脉接种指数为0.11,A/Wide Bird/Ebinur Lake/47/2017（H3N8）静脉接种指数为0.08,均小于1.2,进一步证实其为低致病性禽流感病毒。且在感染第14天对每只鸡分离血清进行血凝抑制试验,其血清阳性率分别为:H1N2（点眼、滴鼻感染）为70%、H1N2（同群感染）为40%、H3N8（点眼、滴鼻感染）为40%、H3N8（同群感染）为20%,但各组血凝抑制效价均很低。结论:本研究成功的从艾比湖野鸟粪便拭子中分离出两株禽流感病毒,且粪便拭子禽流感阳性率为18.75%,证实艾比湖野鸟中存在禽流感病毒。经全基因组序列分析、毒株对雌性balb/c小鼠以及四周龄无免疫鸡的致病性及对分离株进行生物信息学分析研究,证实分离出的两株病毒均为低致病性禽流感病毒;分离株存在多种亚型病毒重组现象,可以感染雌性balb/c小鼠以及可以在四周龄无免疫鸡中复制和传播。
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