目的:本研究制备了具有仿软骨细胞外基质纳米纤维结构壳聚糖微球,并探索这种材料通过bottom-up方案及软骨组织工程技术进行体外软骨样组织工程复合体的构建组织工程复合体。材料和方法:1.利用拉针仪和煅针仪加工玻璃毛细管形成毛细微管,并组装形成微流体装置。2.将壳聚糖溶液和环己烷溶液分别注入微流体装置的内外管内,通过氢氧化钠乙醇溶液固化,超临界二氧化碳干燥后得到仿细胞外基质（ECM）纳米纤维结构的壳聚糖微球,扫描电镜观察材料的结构特征。3.改变微流体装置的参数、壳聚糖溶液及氢氧化钠溶液浓度,制备不同大小和不同结构的壳聚糖微球,通过扫描电镜评价材料的结构特征。4.将不同大小的微球与兔耳软骨细胞进行复合,通过旋转培养瓶培养5d,测定细胞材料黏附率及细胞增殖率,通过细胞骨架染色确定细胞的生长状态,测定细胞外基质糖胺聚糖（GAG）含量。5.将壳聚糖微球与软骨细胞复合,旋转培养瓶培养7d后,放入模具中,继续体外培养2周,将形成的类组织块进行组织学和机械性能检测。结果:1.我们成功的构建了微流体装置。利用微流体装置和临界二氧化碳干燥制备了具有仿细胞外基质结构的壳聚糖微球,微球的表面和内部为均一的纤维网状结构。2.壳聚糖微球材料的直径和纳米纤维直径可以精确调控。3.贴壁法成功培养、传代兔软骨细胞。4.体积最小的微球（150nm）可促进软骨细胞黏附、增殖、ECM分泌。激光共聚焦显微镜观察,软骨细胞在材料表面生长良好,7d后,细胞可以布满整个材料表面,材料间可以通过细胞间的桥接作用连接在一起,形成局部团块。5.将细胞材料放入模具继续培养后,我们成功获得了一种表面光滑、半透明状结构及组织切片染色显示材料之间有软骨细胞外基质沉淀的类软骨组织工程复合体。扫描电子显微镜显示所获得的组织样结构具有和正常猪关节软骨类似的纳米结构。机械性能测定证实该种组织样结构弹性模量良好。结论:1.借助微流体设备通过物理交联过程,我们首次成功制备了仿ECM纳米纤维结构的壳聚糖微球。材料的大小尺寸和纤维结构可精确调控。2.仿ECM壳聚糖纳米微球的纳米纤维结构与壳聚糖溶液和氢氧化钠溶液的浓度相关。壳聚糖溶液和氢氧化钠溶液浓度的升高会导致纳米纤维直径的增加。3.仿ECM壳聚糖微球具有促进软骨细胞黏附、增殖及ECM分泌的作用。4.通过bottom-up方案及软骨组织工程技术,软骨细胞与仿ECM壳聚糖微球复合后,可通过细胞增殖和细胞间的桥接作用形成微团块。在模具中继续培养,可形成类软骨样组织结构。组织学检测显示该结构具有软骨样基质形成,机械性能检测证实该结构具有较强的抗压缩性,扫描电子显微镜结果显示,该组织的纳米纤维结构与正常猪膝关节软骨的细胞外基质结构类似。