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目的:明确miRNA-9在腹部不同脏器肿瘤中的表达情况;进一步确认miR-9在胰腺癌和临近正常胰腺组织标本中的表达情况;分析探讨胰腺癌组织标本中miR-9的表达水平与临床病理参数、患者术后生存期的相关性;通过体外细胞功能实验,探讨miRNA-9对人类胰腺癌细胞株Panc-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:第一部分:miR-9的表达水平与胰腺癌患者临床病理参数和预后的相关性分析1通过RT-PCR技术检测腹部不同脏器肿瘤标本中miR-9的表达水平;2通过RT-PCR技术检测胰腺癌和邻近正常胰腺组织标本中miR-9的表达水平;3胰腺癌患者术后癌组织标本中miR-9的表达水平与临床病理参数的相关性分析(采用四表格Χ检验),以及与胰腺癌患者术后生存期的相关性分析(单因素分析采用Kaplan-Meier进行检验,影响胰腺癌预后的多因素分析采用COX比例风险回归模型);第二部分:miR-9对胰腺癌细胞生物学行为的影响分析1细胞划痕实验检测细胞迁移能力:胰腺癌细胞株Panc-1种植于六孔板待细胞融合度为70%-80%时转染miR-9-inhibitor,抑制其表达并设置阴性转染对照组,待细胞长满后进行划痕,每天观察并比较两组“伤口”的愈合情况,评估miR-9对癌细胞迁移能力的影响;2 Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力:将转染miR-9-inhibitor的Panc-1细胞置于无基质胶和有基质胶的小室上层,并设置阴性转染对照组,分别在细胞培养箱培养48和60小时后镜下观察并统计两组穿过小室的细胞数量,评估miR-9对癌细胞迁移和侵袭能力的影响;3 CCK-8法检测细胞的增殖能力:胰腺癌细胞株Panc-1细胞种植于96孔板,待细胞融合度为30-50%时在lipo2000作用下转染miR-9-inhibitor,抑制其表达并设置阴性转染对照组,分别在细胞培养箱中培养0、24、48、72小时后加入CCK-8试剂,2小时后于酶标仪上检测并比较两组细胞的吸光度,评估miR-9对癌细胞增殖能力的影响。结果:第一部分:miR-9的表达水平与胰腺癌患者临床病理参数和预后的相关性分析结果1通过对腹部不同脏器肿瘤标本中miR-9的表达水平进行检测,结果显示miR-9在胰腺癌中的表达量明显高于其它肿瘤(P<0.05);2通过检测胰腺癌和临近正常胰腺组织标本中miR-9的表达情况,结果显示miR-9在胰腺癌组织标本中的表达量明显高于邻近正常胰腺组织(P<0.05);3 miR-9在胰腺癌组织标本中的表达水平与临床病理参数的相关性分析结果显示:miR-9高表达组的淋巴结发生转移的病例数明显多于低表达组且肿瘤的直径较低表达组要长,肿瘤分化程度较低表达组要低(P<0.05),miR-9高表达组的胰腺癌患者的生存期较低表达组要短(P<0.05),miR-9的表达水平和TNM分期为影响胰腺癌预后的独立因素。第二部分:miR-9对胰腺癌细胞生物学行为的影响分析结果1细胞划痕和Transwell小室实验结果显示:转入miR-9-inhibitor的胰腺癌细胞株Panc-1细胞的“伤口愈合速率”慢于对照组(P<0.05);将转染miR-9-inhibitor的PANC-1细胞种植于无基质胶和有基质胶的Transwell小室内,并设置对照组,分别于48、60小时后镜下观察发现实验组中穿过小室的细胞数明显少于对照组(P<0.05);2 CCK-8实验结果提示:转入miR-9-inhibitor的胰腺癌细胞株Panc-1细胞的增殖能力明显弱于对照组(P<0.05)。结论:1 miR-9在胰腺癌组织标本中的表达量明显高于其它腹部脏器肿瘤,提示:miR-9在胰腺癌中存在富集现象,miR-9在胰腺癌组织标本中的表达量明显高于临近正常胰腺组织,提示miR-9在胰腺癌中发生异常表达;2胰腺癌组织标本中miR-9的表达水平与淋巴结的转移情况、肿瘤大小和肿瘤分化程度具有相关性且高表达组胰腺癌患者的远期生存率明显低于低表达组,推测miR-9促进了胰腺癌的恶性进展,影响胰腺癌预后的多因素分析结果提示:miR-9的表达水平为影响胰腺癌预后的独立因素;3胰腺癌细胞株PANC-1细胞的体外功能实验提示:miR-9在胰腺癌中作为促癌基因发挥作用;