胞嘧啶甲基化是一个表观遗传过程，它能调节特异组织、特异发育阶段的基因表达。胞嘧啶甲基化是由甲基化转移酶完成的，胞嘧啶甲基化转移酶可以将S—腺苷甲硫氨酸上的甲基转移到双链的胞嘧啶上，在真核生物和原核生物中都存在胞嘧啶甲基化转移酶。目前，甲基化在植物中确切的功能尚未有明确的证据。为了进一步研究甲基化在植物中的作用，本文利用RNAi技术将编码水稻甲基化转移酶OsMET1-1与OsMET1-2的基因同时沉默，通过对转基因植株的表型观察和分子生物学技术检测等，进一步探讨甲基化在植物生长发育中的作用，为阐明甲基化在渐渗诱发的表观遗传变异的原因和机理提供依据。 设计了水稻甲基化转移酶OsMET1-1与OsMET1-2基因的2个RNAi结构并构建串联表达的载体。首先扩增2个短链RNA结构的互补DNA序列，正向序列克隆至载体pKannibal中，反向序列先连入pSp72，再用XhoI—KpnI双酶切连入与pKannibal中正向序列相对的内含子的另一侧，构建重组质粒，酶切鉴定后测序分析并连入植物表达载体pBI121中。测序和电泳检测确立了所构建的水稻甲基化转移酶OsMET1-1与OsMET1-2的2个RNAi串联的表达载体。 以粳稻（Oryza sativa）品种（松前和124）的成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料，对组织培养体系及影响遗传转化的因素进行优化，建立了一套农杆菌介导的粳稻遗传转化系统。优化的遗传转化体系为：愈伤组织诱导培养基为N685+2,4—D2mg/L，继代培养基为N6B5+2,4—D1mg/L+NAA0．8 mg/L+KT0．8mg/L，分化培养基为MS合成盐4．4g/L+NAA0．05mg/L+6—BA0．5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6．4g/L+Cef250mg/L，pH5．8。另外，分析了影响根癌农杆菌介导的目的基因转化水稻的多种因素：愈伤组织继代次数、培养基种类、农杆菌侵染外植体时的浓度、共培养时间和干燥处理等。 本实验目前获得10丛转基因植株，其中6丛松前，4丛124，经GFP检测和PCR检测，证明了外源基因已经整合到水稻基因组中，10丛转化植株均为转基因阳性。6丛松前全部结籽，4丛124尚没有结籽，推测有品种差异性。从表型上来看，与经组织培养直接分化得到的非转基因植株相比，转基因植株矮小，分蘖少，部分叶片中间卷曲，开花提前，结籽较少，有的生长期缩短。转基因的124植株表现出高度不育现象，并且部分叶片中间卷曲，生长期偏短，过早衰老。 获得的T1代种子已经种植，进一步的观察和研究正在进行。这些转基因材料有待于进一步的分析和继代培养，为深入研究甲基化在植物生长发育和表观遗传中的作用提供依据。