【摘 要】
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背景宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,目前,尽管放疗、化疗和手术等在宫颈癌治疗中普遍采用,但在宫颈癌进展中,远处转移是导致宫颈癌患者死亡最常见的原因。近些年来,研究发现DIAPH3参与肺癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、胃癌的发生发展。Linling Wan等人发现DIAPH3通过m TOR信号通路抑制宫颈癌细胞增殖,但目前DIAPH3在宫颈癌迁移侵袭中作用及分子机制未见报道。课题组拟利用基因转染、体外侵
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背景宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,目前,尽管放疗、化疗和手术等在宫颈癌治疗中普遍采用,但在宫颈癌进展中,远处转移是导致宫颈癌患者死亡最常见的原因。近些年来,研究发现DIAPH3参与肺癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、胃癌的发生发展。Linling Wan等人发现DIAPH3通过m TOR信号通路抑制宫颈癌细胞增殖,但目前DIAPH3在宫颈癌迁移侵袭中作用及分子机制未见报道。课题组拟利用基因转染、体外侵袭迁移实验来检测DIAPH3在宫颈癌细胞迁移侵袭中的作用,为宫颈癌的诊治提供新的分子靶点。目的以四株人宫颈癌细胞Si Ha、He La、Caski和C33A为研究对象,分析DIAPH3的表达情况,探究DIAPH3对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法1.运用基因表达谱交互研究数据库（gene expression profiling interactive analysis,GEPIA）在线分析宫颈癌组织中DIAPH3在m RNA水平的表达情况。2.运用蛋白质印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-PCR）方法检测Si Ha、He La、Caski和C33A四株宫颈癌细胞及人子宫颈上皮永生化细胞系H8中DIAPH3蛋白质及m RNA的表达情况。3.利用DIAPH3的si RNA干扰片段及过表达质粒分别转染宫颈癌细胞,并利用Western blot和q PCR进行转染效率验证。4.利用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测干扰/过表达DIAPH3后对宫颈癌细胞迁移和侵袭的作用。5.通过基因富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）分析宫颈癌与DIAPH3的相关通路。利用Western blot检测干扰/过表达DIAPH3后宫颈癌细胞中MMP2、MMP9、p-ERK、p-AKT蛋白质的表达水平。结果1.GEPIA数据库分析结果表明:DIAPH3 m RNA在宫颈癌组织中的表达水平显著高于宫颈癌癌旁组织（P＜0.05）。2.Western blot及q RT-PCR结果显示:DIAPH3在四株宫颈癌细胞中表达均显著高于人子宫颈上皮永生化细胞系H8（P＜0.05）。3.在Si Ha和Hela细胞中干扰DIAPH3后,DIAPH3蛋白质及m RNA的表达显著低于对照组（P＜0.05）;在Caski和C33A细胞中过表达DIAPH3后,DIAPH3蛋白质及m RNA的表达均显著高于对照组（P＜0.05）。4.划痕愈合实验结果显示:在Si Ha和Hela细胞中干扰DIAPH3后,细胞的迁移率比对照组显著减少（P＜0.05）;在Caski和C33A细胞中过表达DIAPH3后,细胞的迁移率比对照组显著增多（P＜0.05）。5.Transwell小室侵袭实验提示:干扰DIAPH3后,Si Ha和Hela细胞的侵袭数目比对照组显著减少（P＜0.05）;过表达DIAPH3后,Caski和C33A细胞的侵袭数目比对照组显著增多（P＜0.05）。6.GSEA分析结果显示:DIAPH3与迁移侵袭密切相关（P＜0.05）。Western blot结果显示:干扰DIAPH3后Si Ha和Hela细胞中MMP2、MMP9、p-ERK、p-AKT蛋白质表达均显著低于对照组（P＜0.05）;过表达DIAPH3后Caski和C33A细胞中MMP2、MMP9、p-ERK、p-AKT蛋白质表达均显著高于对照组（P＜0.05）。结论DIAPH3促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭,其分子机制与MMP2、MMP9、p-ERK和p-AKT蛋白质表达上调相关。
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