【摘 要】
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CCR-L2/FXYD6基因是本课题小组前期研究获得的胆管癌相关新基因,FXYD6基因是FXYD基因家族中的一个新成员,全称为包含FXYD氨基酸链的离子转运调节因子成员6(FXYD domain-conta
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CCR-L2/FXYD6基因是本课题小组前期研究获得的胆管癌相关新基因,FXYD6基因是FXYD基因家族中的一个新成员,全称为包含FXYD氨基酸链的离子转运调节因子成员6(FXYD domain-containing ion transport regulator 6)。已知FXYD基因家族蛋白产物功能与细胞膜的离子转运调节有关,但其主要功能尚属未知。作为胆管癌基础研究的重点,肿瘤相关基因的研究目前仍无突破性进展。鉴于胆管细胞的许多重要功能调节与细胞膜表面离子通道的功能有关,有必要对此开展深入研究。 本研究主要将生物信息学方法与分子生物学方法结合,从人组织cDNA文库(肝、脑)获得胆管癌相关的新基因FXYD6全长序列,借助计算机蛋白质分析软件预测该基因的二级结构和功能位点,首次设计了FXYD6基因信号肽剪切后功能区蛋白体外表达序列;并将其克隆到pGEM-T和pBV220表达载体上;继而以大肠杆菌作为表达系统,使剪切后功能区蛋白在大肠杆菌中获得了体外表达。主要内容共分三部分: 1、采用Touch-down多步骤退火PCR方法,从胎肝cDNA文库、脑cDNA文库克隆出FXYD6基因全长cDNA序列,为后续研究提供基础,但在脾cDNA文库中未获得目的基因;
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