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目的：化学合成抗新城疫病毒(NDV)繁殖的九肽二串联体(Nonapeptide2)基因及其突变体(Nonapeptide2-M)基因，分别在大肠杆菌中克隆和融合表达，为进一步研究两者的抗病毒活性奠定基础。
方法：根据文献报道的氨基酸序列，应用大肠杆菌偏爱密码子，设计抗NDV繁殖的九肽(Nonapeptide)二串联体基因序列。对该九肽进行改造，将6位赖氨酸置换为酪氨酸，同样选择大肠杆菌偏爱密码子，得到其突变体基因。在基因两端分别加入限制性内切酶EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ的酶切位点，在相邻Nonapeptide间加入了蛋氨酸密码子，突变体同Nonapeptide加入蛋氨酸密码子，化学合成该九肽二串联体基因(Nonapeptide2)及其突变体基因(Nonapeptide2-M)。将Nonapeptide2、Nonapeptide2-M分别与经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切后的克隆载体pUC18连接、转化大肠杆菌DH5a，经蓝白筛选，挑取阳性菌落，抽提重组质粒，酶切、PCR鉴定并测序。酶切克隆重组体得到目的基因，与经相同酶切后的表达载体pGEX-4T-1连接，转化大肠杆菌BL21，挑出阳性菌落，抽提重组质粒，酶切、PCR鉴定并测序。将鉴定为阳性的茵落用IPTG 37℃诱导表达GST融合蛋白2-5小时，SDS-PAGE电泳观察表达结果。收集含融合蛋白的大肠杆菌BL21，使用GST融合蛋白纯化试剂盒裂解包涵体，纯化融合蛋白，用凝血酶对融合蛋白进行切割分离。
结果：
1、分别将Nonapeptide2、Nonapeptide2-M克隆到载体pUC18上，初步检测、筛选阳性转化子，并测序，结果表明与预先设计的Nonapeptide2、Nonapeptide2-M基因序列一致，克隆重组质粒构建成功。
2、构建了融合表达载体pGEX-4T-1与Nonapeptide2、Nonapeptide2-M重组质粒，初步检测、筛选阳性转化子，进一步测序正确，可以进行诱导表达。
3、Nonapeptide2、Nonapeptide2-M插入表达载体pGEX-4T-1后，经IPTG诱导表达2-5h，SDS-PAGE电泳结果可见约29KD的融合蛋白条带.说明两条目的基因得到融合表达。
4、收集分别含Nonapeptide2融合蛋白、Nonapeptide2-M融合蛋白的大肠杆菌BL21，使用GST融合蛋白纯化试剂盒裂解包涵体，纯化、溶解融合蛋白，用凝血酶切割融合蛋白，初步得到分别含Nonapeptide2蛋白及突变体Nonapeptide2-M蛋白的混合液。
结论：成功克隆了抗NDV繁殖的九肽二串联体(Nonapeptide2)及其突变体(Nonapeptide2-M)基因，构建了两者的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达成功，并对表达融合蛋白进行了初步纯化，为进一步比较两种短肽的抗NDV活性，筛选出具高效抗NDV活性的肽及制备抗NDV的生物肽药物研究奠定了基础。