斜纹夜蛾中肠胰凝乳蛋白酶基因(Slctlp1)的克隆、表达、定位及功能初步分析

来源 :华南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yusaihua
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
丝氨酸蛋白酶广泛存在于鳞翅目昆虫中,在昆虫发育过程中参与了各种生理活动,包括食物消化、营养吸收,血液凝固,免疫反应,信号转导等。我们从斜纹夜蛾(Spodoptera litura)六龄第三天幼虫的中肠EST文库中获得一个编码胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)的全长cDNA,命名为Slctlpl(chymotrypsin like protein),克隆并分析了它的基因结构,组织定位,研究了它的发育和诱导表达,并进行了功能的初步鉴定。Slctlpl的cDNA由1009个核苷酸组成,编码295个氨基酸的多肽,预测的分子量为3 0.6 kDa,等电点为8.2 8。该基因编码的蛋白质具有昆虫胰凝乳蛋白酶典型的结构特征,包括催化三联体,与底物特异性结合的口袋和6个保守的半胱氨酸残基。和其他物种的核苷酸序列比对分析发现,该基因和草地贪夜蛾的同源性最高,相似性可达92%。Southern blot的结果表明,在斜纹夜蛾基因组中,该基因具有多个拷贝数。分别以cDNA和基因组DNA为模板,使用相同引物扩增出目的基因,并对PCR产物测序的结果分析,发现该基因有5个外显子和4个内含子。RT-PCR、Northern blot和Western blot检测发现,该基因无论是在转录水平还是在蛋白质水平主要都在幼虫的中肠表达,并且表达量在进食期较高,而在蜕皮、预蛹和蛹期的表达量明显减少。另外,SLCTLP1蛋白在表皮和脂肪体也有较低量的表达。分析SLCTLP1蛋白的分泌形式,发现该基因在中肠细胞合成后分泌到肠腔,并在肠腔被水解成有活性的蛋白。饥饿处理6龄幼虫后,该基因的mRNA和蛋白质水平明显降低,而重新进食又能刺激其表达的上升。这些结果暗示着Slctlp1基因与幼虫发育的进食期密切相关,推测可能参与了食物消化的过程。为了进一步了解它在昆虫生长发育中可能的作用,通过RNAi技术干扰该基因的表达,发现其mRNA和蛋白质水平的表达均有明显的抑制,但并没有观察到明显的表型变化。推测可能的原因是昆虫的中肠有许多类型的消化酶,这些消化酶可以起到补偿缺失Slctlp1基因的作用。
其他文献
五味子是木兰科植物五味子(Schisandra chinesnsis(Turcz.)Baill.)的干燥成熟果实。药理学研究证明,五味子对中枢神经系统的作用是通过多种途径而实现的。本研究室的系列研究表明,
随着能源危机的加剧和环保的要求,探索发展替代燃料及可再生能源成为世界各国迫切需要解决的问题。生物柴油(Biodiesel)作为一种生物质能最引人注目,它是一种含氧清洁燃料,具有
铁系锂离子电池正极材料在经济性、环保性、安全性方面与传统的锂离子电池正极材料相比具有突出的优势。研究开发新型铁系锂离子电池正极材料具有很高的科学意义和实际应用价
减粘裂化是一种较为成熟的热加工工艺,由于其投资费用低、操作费用少、可靠性高等优点,已成为重油改质的重要手段。本文利用小型高压釜装置,分别对华北减压渣油及其脱油沥青与催
稠油的开采是扩大石油资源利用的重要途径,然而由于稠油粘度高,流动性差,含蜡量的影响,使开采难度增大。目前研究表明微生物能够通过自身及其代谢产物的作用降低稠油的粘度,或对油