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第一部分载FK506缓释PLGA纳米粒的制备及性质评价
目的：制备载FK506缓释PLGA纳米粒(PLGA-FK506-NPs)并评估其表征。
方法：①超声乳化溶剂挥发法制备PLGA-FK506-NPs；②扫描电镜、透射电镜观察PLGA-FK506-NPs形态；③动态光散射技术测定其粒径并评价48h内粒径稳定性；④高效液相色谱仪测定PLGA-FK506-NPs中FK506含量并计算包封率及载药率；⑤体外模拟FK506释放过程，高效液相色谱仪测定FK506释放率；⑥以磷酸盐缓冲液(PBS)及单纯FK506为对照组，PLGA-FK506-NPs为实验组，实验分组干预24h后，取大鼠全血、血清及组织，分别行血常规分析、血生化分析及主要器官组织苏木素-伊红染色，评价PLGA-FK506-NPs的安全性。
结果：①电镜结果显示PLGA-FK506-NPs分散性较好，呈类圆形；②PLGA-FK506-NPs粒径与电位分别为110.2±1.3nm、-20.56±3.65mv，包封率与载药率分别为94.46±1.88%、5.38±0.24%；③PLGA-FK506-NPs在去离子水及PBS中粒径稳定性好，时间可达48h；④PLGA-FK506-NPs7d体外释放率为50.99±1.87%，对照组单纯FK506，4h释放率为50.37±1.05%；⑤血细胞、白细胞、血小板、淋巴细胞、中性粒细胞及单核细胞计数正常，与PBS组、单纯FK506组对比，无明显统计学差异；⑥主要器官(心、肝、脾、肺、肾)组织病理结果显示无明显出血、炎性细胞渗出等组织损伤改变。
结论：本研究利用超声乳化溶剂挥发法成功制备了PLGA-FK506-NPs，其粒径相对均一，包封率较高，稳定性好，有缓释效应且安全性良好。
第二部分大鼠异位心脏移植模型建立及评估
目的：建立大鼠异位心脏移植模型；联合超声灌注成像评估不同程度急性排斥反应(acute rejection, AR)；监测同系移植及同种异体移植大鼠移植心的生存时间。
方法：①采取Ono术式建立大鼠腹腔异位心脏移植模型；②取BrownNorway(BN)大鼠作供体，Lewis大鼠作受体，建立同种异体移植模型；取Lewis大鼠作供体，Lewis大鼠作受体建立同系移植模型；③分别于术后3、5、7d行超声灌注成像，成像后取移植心行苏木素-伊红染色与CD3、CD68、CD31免疫组织化学染色；④建立同种异体移植和同系移植模型各6只，通过观察、触摸、超声心动图检查等方法，对两组模型生存时间进行评估。
结果：①成功建立大鼠腹腔异位移植模型，成功率91.3%；②随时间增加，同种异体移植心排斥程度逐渐加重，T细胞、巨噬细胞浸润程度增多，微血管密度逐渐减少，超声灌注成像峰值信号强度减少；③同系移植心随时间增加排斥程度无明显变化，T细胞、巨噬细胞浸润和微血管密度无明显改变，超声灌注成像峰值信号强度变化无明显差异；④28d生存时间观察中，同种异体移植心平均生存时间(mean survival time, MST)为7.4±1.0d，同系移植心MST均大于28d。
结论：大鼠腹腔异位心脏移植模型随时间增加，AR呈进行性加重，超声灌注成像可辅助评估AR程度。
第三部分载FK506缓释PLGA纳米粒抑制心脏移植急性排斥反应
目的：分析单纯FK506与PLGA-FK506-NPs在大鼠中的药代动力学及淋巴器官中FK506含量，评估两者抑制心脏移植AR效果。
方法：①以DiR染料模拟FK506，用活体成像仪观察观察单纯DiR染料和DiR染料标记的PLGA纳米粒(PLGA-DiR-NPs)大鼠体内分布情况；②质谱联用仪测定不同时间大鼠全血中FK506含量以评估PLGA-FK506-NPs药代动力学，测量脾脏，肠系膜、腹股沟、腋窝淋巴结中FK506含量；③建立同种异体移植大鼠模型，分别尾静脉注射PBS、单纯FK506、PLGA-FK506-NPs(1 mg/kg)，术后第7d取大鼠移植心(每组5只)行苏木素-伊红染色、CD3免疫组织化学染色、IFN-γ、IL-2免疫荧光染色；④通过观察、触摸、超声心动图检查等方式，对各组移植模型(每组5-6只)进行生存时间评估。
结果：①活体成像结果显示，相比于单纯DiR染料组，PLGA-DiR-NPs在脾脏及淋巴结的荧光强度显著增加；②PLGA-FK506-NPs组药物时间曲线下面积为单纯FK506组1.69倍；③脾脏FK506含量，PLGA-FK506-NPs组为单纯FK506组的3.1倍，肠系膜淋巴结FK506含量为单纯FK506组2.9倍；④PBS组移植心MST为7.6±1.1d，PLGA-FK506-NPs组移植心MST为17.1±2.0d，与单纯FK506组(13.3±1.7d)相比，差异具有统计学意义(P<0.01)；⑤PBS组移植心排斥反应病理分级为3R，PLGA-FK506-NPs治疗组排斥反应等级1R占40%，2R占40%，3R占20%，单纯FK506组排斥反应等级1R占20%，2R占60%，3R占20%；⑥相比于PBS组，单纯FK506治疗组与PLGA-FK506-NPs治疗组T细胞浸润程度明显减轻；⑦相比于PBS组，单纯FK506治疗组与PLGA-FK506-NPs治疗组IFN-γ、IL-2分泌减少，PLGA-FK506-NPs治疗组IFN-γ、IL-2分泌最低。
结论：PLGA-FK506-NPs增加脾脏及肠系膜淋巴结中FK506含量，改善药代动力学参数，延长移植物生存时间，减轻AR的程度，减少炎性细胞因子分泌。
目的：制备载FK506缓释PLGA纳米粒(PLGA-FK506-NPs)并评估其表征。
方法：①超声乳化溶剂挥发法制备PLGA-FK506-NPs；②扫描电镜、透射电镜观察PLGA-FK506-NPs形态；③动态光散射技术测定其粒径并评价48h内粒径稳定性；④高效液相色谱仪测定PLGA-FK506-NPs中FK506含量并计算包封率及载药率；⑤体外模拟FK506释放过程，高效液相色谱仪测定FK506释放率；⑥以磷酸盐缓冲液(PBS)及单纯FK506为对照组，PLGA-FK506-NPs为实验组，实验分组干预24h后，取大鼠全血、血清及组织，分别行血常规分析、血生化分析及主要器官组织苏木素-伊红染色，评价PLGA-FK506-NPs的安全性。
结果：①电镜结果显示PLGA-FK506-NPs分散性较好，呈类圆形；②PLGA-FK506-NPs粒径与电位分别为110.2±1.3nm、-20.56±3.65mv，包封率与载药率分别为94.46±1.88%、5.38±0.24%；③PLGA-FK506-NPs在去离子水及PBS中粒径稳定性好，时间可达48h；④PLGA-FK506-NPs7d体外释放率为50.99±1.87%，对照组单纯FK506，4h释放率为50.37±1.05%；⑤血细胞、白细胞、血小板、淋巴细胞、中性粒细胞及单核细胞计数正常，与PBS组、单纯FK506组对比，无明显统计学差异；⑥主要器官(心、肝、脾、肺、肾)组织病理结果显示无明显出血、炎性细胞渗出等组织损伤改变。
结论：本研究利用超声乳化溶剂挥发法成功制备了PLGA-FK506-NPs，其粒径相对均一，包封率较高，稳定性好，有缓释效应且安全性良好。
第二部分大鼠异位心脏移植模型建立及评估
目的：建立大鼠异位心脏移植模型；联合超声灌注成像评估不同程度急性排斥反应(acute rejection, AR)；监测同系移植及同种异体移植大鼠移植心的生存时间。
方法：①采取Ono术式建立大鼠腹腔异位心脏移植模型；②取BrownNorway(BN)大鼠作供体，Lewis大鼠作受体，建立同种异体移植模型；取Lewis大鼠作供体，Lewis大鼠作受体建立同系移植模型；③分别于术后3、5、7d行超声灌注成像，成像后取移植心行苏木素-伊红染色与CD3、CD68、CD31免疫组织化学染色；④建立同种异体移植和同系移植模型各6只，通过观察、触摸、超声心动图检查等方法，对两组模型生存时间进行评估。
结果：①成功建立大鼠腹腔异位移植模型，成功率91.3%；②随时间增加，同种异体移植心排斥程度逐渐加重，T细胞、巨噬细胞浸润程度增多，微血管密度逐渐减少，超声灌注成像峰值信号强度减少；③同系移植心随时间增加排斥程度无明显变化，T细胞、巨噬细胞浸润和微血管密度无明显改变，超声灌注成像峰值信号强度变化无明显差异；④28d生存时间观察中，同种异体移植心平均生存时间(mean survival time, MST)为7.4±1.0d，同系移植心MST均大于28d。
结论：大鼠腹腔异位心脏移植模型随时间增加，AR呈进行性加重，超声灌注成像可辅助评估AR程度。
第三部分载FK506缓释PLGA纳米粒抑制心脏移植急性排斥反应
目的：分析单纯FK506与PLGA-FK506-NPs在大鼠中的药代动力学及淋巴器官中FK506含量，评估两者抑制心脏移植AR效果。
方法：①以DiR染料模拟FK506，用活体成像仪观察观察单纯DiR染料和DiR染料标记的PLGA纳米粒(PLGA-DiR-NPs)大鼠体内分布情况；②质谱联用仪测定不同时间大鼠全血中FK506含量以评估PLGA-FK506-NPs药代动力学，测量脾脏，肠系膜、腹股沟、腋窝淋巴结中FK506含量；③建立同种异体移植大鼠模型，分别尾静脉注射PBS、单纯FK506、PLGA-FK506-NPs(1 mg/kg)，术后第7d取大鼠移植心(每组5只)行苏木素-伊红染色、CD3免疫组织化学染色、IFN-γ、IL-2免疫荧光染色；④通过观察、触摸、超声心动图检查等方式，对各组移植模型(每组5-6只)进行生存时间评估。
结果：①活体成像结果显示，相比于单纯DiR染料组，PLGA-DiR-NPs在脾脏及淋巴结的荧光强度显著增加；②PLGA-FK506-NPs组药物时间曲线下面积为单纯FK506组1.69倍；③脾脏FK506含量，PLGA-FK506-NPs组为单纯FK506组的3.1倍，肠系膜淋巴结FK506含量为单纯FK506组2.9倍；④PBS组移植心MST为7.6±1.1d，PLGA-FK506-NPs组移植心MST为17.1±2.0d，与单纯FK506组(13.3±1.7d)相比，差异具有统计学意义(P<0.01)；⑤PBS组移植心排斥反应病理分级为3R，PLGA-FK506-NPs治疗组排斥反应等级1R占40%，2R占40%，3R占20%，单纯FK506组排斥反应等级1R占20%，2R占60%，3R占20%；⑥相比于PBS组，单纯FK506治疗组与PLGA-FK506-NPs治疗组T细胞浸润程度明显减轻；⑦相比于PBS组，单纯FK506治疗组与PLGA-FK506-NPs治疗组IFN-γ、IL-2分泌减少，PLGA-FK506-NPs治疗组IFN-γ、IL-2分泌最低。
结论：PLGA-FK506-NPs增加脾脏及肠系膜淋巴结中FK506含量，改善药代动力学参数，延长移植物生存时间，减轻AR的程度，减少炎性细胞因子分泌。