【摘 要】
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目的:EB病毒（Epstein-barr virus,EBV）是一种广泛感染性病毒,与鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma,NPC）的发生发展密切相关。潜伏膜蛋白1（Latent membrane protein 1,LMP1）是EB病毒编码的在鼻咽癌中表达的具有致瘤作用的蛋白质,已被证明能够恶性转化多种上皮细胞。已知LMP1传递癌化信号需要脂筏的支持,硫脑苷脂（Sulfati
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目的:EB病毒（Epstein-barr virus,EBV）是一种广泛感染性病毒,与鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma,NPC）的发生发展密切相关。潜伏膜蛋白1（Latent membrane protein 1,LMP1）是EB病毒编码的在鼻咽癌中表达的具有致瘤作用的蛋白质,已被证明能够恶性转化多种上皮细胞。已知LMP1传递癌化信号需要脂筏的支持,硫脑苷脂（Sulfatide,ST）作为脂筏中主要的鞘糖脂成分或许参与LMP1的信号传递过程。本研究拟利用基因过表达技术构建硫脑苷脂敲除细胞系,以观察硫脑苷脂是否在LMP1恶性转化细胞过程中起作用,为鼻咽癌的防治提供新的靶向位点。方法:使用脂质体转染法将pc DNA3.1-GFP与pc DNA3.1-ARSA分别导入MDCK细胞（以亲代细胞作对照）,筛选14天后挑单克隆进行扩大培养,获得稳定表达ARSA的细胞系,硫脑苷脂被显著敲低。分别将LMP1过表达载体转入硫脑苷脂敲低细胞即ARSA-MDCK和载体对照细胞GFP-MDCK,并设置空白对照和载体对照,产生GFP-MDCK、GFP-Neo-MDCK、GFP-LMP1-MDCK、ARSA-MDCK、ARSA-Neo-MDCK、ARSA-LMP1-MDCK 6组细胞,观察检测以上转染后细胞的生长情况、增殖能力、细胞周期分布、细胞侵袭能力和细胞迁移能力,并使用蛋白印迹和免疫荧光技术测定细胞中NF-κB p65的活化情况。结果:1.相比于GFP-LMP1-MDCK组细胞,ARSA-MDCK经LMP1转染后细胞形态并没有向成纤维细胞形态转变;2.GFP-LMP1-MDCK组细胞增殖能力、细胞迁移能力和细胞侵袭能力均比对照组细胞增强,然而ARSA-LMP1-MDCK组与其他对照组细胞一样,细胞增殖能力、细胞迁移能力和细胞侵袭能力没有明显变化;3.细胞周期测定中,GFP-LMP1-MDCK组S期细胞所占比例均比对照组升高,ARSA-LMP1-MDCK组细胞周期分布没有明显变化;4.ARSA-LMP1-MDCK组细胞和对照组一样没有出现GFP-LMP1-MDCK组细胞中NF-κB p65活化水平的提高。结论:1.LMP1转染细胞可以使细胞形态发生改变,细胞增殖能力、细胞周期分布、细胞侵袭能力和细胞迁移能力均发生变化,通过NF-κB p65的活化进行信号传递;2.硫脑苷脂敲除后LMP1不能诱导信号通路促使细胞发生恶性转化。3.硫脑苷脂可促进EB病毒诱导鼻咽癌过程中信号通路的激活。
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