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结直肠癌(carcinoma of colon and rectum)是最常见的消化道肿瘤之一,中国结直肠癌发病数占全球24.3%。目前,外科手术为首选治疗手段。对于无法接受手术治疗的患者,主要采取化疗手段。然而随着病程进展,化疗产生的耐药性大大降低了治疗效果,因此,我们需要进一步探索结直肠癌化疗耐药机制,为临床治疗结直肠癌提供新的策略。在进化中高度保守的Notch信号通路参与了多种组织和器官的细胞凋亡、增殖和分化过程。Notch与Ras、m TOR和NF-κB等多种信号转导途径都有着密切联系。在乳腺癌、胃癌、肺癌等实体瘤中均发现了Notch受体或配体高表达的现象。Notch1是Notch信号通路的主要受体之一,通过与配体特异性结合,来调控下游靶点。在多种恶性肿瘤的发生发展中,均存在Notch1的异常表达。且已证实其与肿瘤的放、化疗耐受相关。奥沙利铂是治疗结直肠癌的一线药物。其发挥治疗作用的主要分子机制是造成肿瘤细胞DNA损伤。在DNA损伤应答过程中,关键分子蛋白ATM蛋白可启动损伤修复程序。而当损伤程度超出承受范围无法修复时,则启动凋亡程序。而活化的Notch1可通过作用于ATM蛋白,在辐射造成的DNA损伤应答中,促进细胞凋亡。基于以上研究背景,我们希望能够进一步探索,在奥沙利铂所诱导的结直肠癌细胞DNA损伤过程中,活化的Notch1所起到的作用。我们选取DLD1和SW620两种结直肠细胞,采取两种给药方式:单纯给予奥沙利铂、奥沙利铂联合DAPT。之后检测DLD1和SW620细胞的凋亡情况,和两种细胞中DNA损伤情况。探究抑制Notch1活化对奥沙利铂诱导结直肠癌细胞DNA损伤和凋亡的调控机制。方法:1.应用CCK-8检测奥沙利铂对DLD1和SW620细胞活力和增殖能力的影响。2.应用Western Blot及流式细胞术检测奥沙利铂对DLD1和SW620细胞DNA损伤的影响。DAPT联合奥沙利铂对DLD1和SW620细胞DNA损伤及凋亡的影响3.应用Western Blot检测在不同时间作用下,奥沙利铂对DLD1和SW620细胞DNA损伤的影响。DAPT对DLD1和SW620细胞中NICD蛋白表达的影响。4.应用CCK-8检测DAPT对DLD1和SW620细胞活力的影响。DAPT联合奥沙利铂对DLD1和SW620细胞活力和增殖能力的影响。结果:1.随着奥沙利铂浓度的倍增,DLD1和SW620细胞活力及增殖能力明显被抑制。NICD蛋白表达增加,细胞凋亡数目增加。γ-H2AX、p-CHK2、p-ATM蛋白表达逐渐增加。在相对低浓度时,p-BRCA1蛋白表达增加,而随着奥沙利铂浓度倍增,表达减少。p-P53、cleaved-caspase3蛋白表达逐渐增加。2.DAPT能够抑制DLD1和SW620细胞中NICD蛋白表达,且对两种细胞活力有一定抑制作用。3.与对照组、单独给予DAPT和奥沙利铂组相比,联合组对DLD1和SW620细胞的活力、增殖能力抑制更明显。γ-H2AX、p-CHK2、p-ATM、p-P53、cleaved-caspase3蛋白表达逐渐增加。4.奥沙利铂随着时间连续作用(0.5h、1h、2h、8h、16h、24h),两种细胞中γ-H2AX,p-P53蛋白表达逐渐增多,p-ATM蛋白随着时间表达先增多后降低。结论:1.结直肠癌中,奥沙利铂诱导DNA损伤应答反应及p53介导细胞凋亡的同时,Notch1活性增强。2.在奥沙利铂作用下,抑制Notch1活化可增强结直肠癌细胞DNA损伤应答相关的p53介导的细胞凋亡。