玉米肽葛花异黄酮及其复合物对乙醇脱氢酶活性的影响

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目前解酒剂的研究均以解酒毒、疏肝胆、清湿热、化痰结、行积滞等中医理论为出发点,通过增强肝脏解毒和体内酶的催化反应及利尿作用加速体内乙醇的分解和排泄,或阻止消化道对乙醇的吸收以减缓乙醇对中枢神经系统的作用,降低乙醇对肝脏的损害,促进肝细胞再生,增加脑及冠状血管流量,缓解中毒症状。本研究通过玉米肽,葛花异黄酮和葛根异黄酮分别对乙醇脱氢酶活性影响的研究,选出玉米肽与葛花异黄酮进行复配并研究其对体内外乙醇脱氢酶活性的影响,为玉米肽与异黄酮应用于解酒领域奠定一定的理论基础。1.通过单因素试验和响应面试验(Response Surface Methodology, RSM)确定碱性蛋白酶水解玉米蛋白粉获得玉米肽的最佳水解条件:温度为56℃,pH为9.1,时间为2h,此条件下玉米蛋白粉的水解度为21.82%。2.通过单因素试验和响应面试验确定了葛花异黄酮的最佳提取提取条件:提取温度为86℃,乙醇浓度为75%,提取时间为2h,固液比为1:21(g/mL)。此条件下葛花异黄酮得率为9.750mg/g。3.通过单因素试验和正交试验确定了葛根异黄酮的最佳微波—超声提取条件:微波时间为6min,微波功率为400W,固液比为1:20(g/mL),超声时间为40min。以最佳试验条件进行试验,得到葛根异黄酮得率为11.123mg/g。4.采用瓦勒霍赫(Vallee&Hoch)法研究玉米肽、葛花异黄酮、葛根异黄酮在离体条件下对乙醇脱氢酶(ADH)活性的影响,发现玉米肽,葛花异黄酮和葛根异黄酮都对乙醇脱氢酶起激活作用,但葛根异黄酮对乙醇脱氢酶的激活作用明显弱于玉米肽和葛花异黄酮。选择玉米肽与葛花异黄酮进行复配,研究其复配物对乙醇脱氢酶活性的影响。当玉米肽与葛花异黄酮配比为1:0.25时复合物对乙醇脱氢酶的激活率为74.45%,接近于玉米肽对乙醇脱氢酶激活率(76.52%),比葛花异黄酮对乙醇脱氢酶激活率高27.36%。该试验表明玉米肽和葛花异黄酮对离体条件下的乙醇脱氢酶的激活协同作用不明显。动物(昆明种小鼠)试验表明玉米肽,葛花异黄酮及其复合物具有明显的防醉和醒酒功效。防醉和醒酒的可能机制为提高小鼠乙醇脱氢酶的活性。采用瓦勒霍赫法测定小鼠肝乙醇脱氢酶活性发现玉米肽对乙醇脱氢酶的激活作用最明显,复合物次之,说明玉米肽与葛花异黄酮对小鼠体内的乙醇脱氢酶的激活协同作用不明显,但在防醉方面有突出表现,效果明显。5.当玉米肽与葛花异黄酮配比为1:0.25时,玉米肽-葛花异黄酮复合物对2,2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)自由基的清除率为77.83%,接近于玉米肽对DPPH自由基的清除率(78.43%),比葛花异黄酮对DPPH自由基的清除率(63.62%)高14.21%。即在玉米肽与葛花异黄酮配比为1:0.25时对DPPH自由基的清除率高,对ADH激活作用越强。
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