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背景:肾小球是由基底膜上系膜细胞分泌的基质支持复杂的毛细血管网构成的高级微循环。足细胞是既有上皮细胞特点又有间叶细胞特点的一种特殊分化细胞,在肾脏发育过程中经历了由未分化到高度分化的过程。足细胞在形成和维持肾小球滤过膜结构中起重要作用,足细胞中存在着多种特异性标志物,如synaptopodin、nephrin、podocalyxin等。近年来研究发现足细胞具有血管平滑肌细胞的特性,且在足细胞中发现了myocardin的表达。文献报道myocardin家族是调控平滑肌细胞分化的关键转录因子,那么它在足细胞由增殖型到分化型的过程中扮演了什么角色呢?G-1作为一种雌激素受体GPR30的特异性激动剂,促进或抑制细胞的增殖。
目的:本研究检测平滑肌细胞标志基因及其相关调节因子myocardin,MRTF-A,MRTF-B和SM22a等在足细胞分化过程中的表达以进一步确证足细胞在发育过程中与血管平滑肌细胞的相似性;讨论可以抑制血管平滑肌细胞增殖的G-1对足细胞的作用。
方法:体外培养转基因小鼠足细胞系MPC5,选取其分化至第0、3、6、9、11、14天的细胞,提取RNA,用realtime PCR方法检测血管平滑肌细胞标志基因及其相关调节因子myocardin、MRTF-A、MRTF-B、SM22α的表达;WST-1法检测G-1对足细胞增殖的影响;采取Western blot法检测G-1对足细胞增殖相关信号通路的影响,以及细胞周期相关蛋白在药物处理后的表达变化,进一步探究它对足细胞增殖的作用;通过realtime PCR方法检测足细胞分化相关基因表达变化情况,探讨其对足细胞分化的作用;足细胞在低血清饥饿后,可引起自噬,采用Western blot法检测G-1对足细胞LC3-Ⅱ的表达水平的影响探讨其对足细胞自噬发生的作用。
结果:足细胞在分化过程中出现平滑肌细胞分化转录因子myocardin、MRTFS SM22a的表达;G-1可以抑制足细胞中ERK信号通路,同时细胞周期负调控因子p27蛋白表达水平升高,PCNA表达量下调从而抑制足细胞增殖;G-1可以促进足细胞中的促平滑肌细胞分化基因MRTF-A,B的表达;G-1对足细胞足突标志基因CD2AP的表达有促进作用,由此可以初步推断G-1对足细胞的分化有促进保护作用;G-1可以上调LC3-Ⅱ的表达水平,即自噬水平升高。
结论:足细胞表达平滑肌细胞相关基因,具有类平滑肌细胞特质;G-1可以抑制小鼠足细胞增殖并对其分化有促进作用;G-1对足细胞在饥饿状态下的自噬有促进作用。