2006年，yamanaka等人借助逆转录病毒将Oct4、Klf4、c-Myc和Sox2四个基因导入到小鼠胎儿成纤维细胞中，使其重编程为类似ES细胞的诱导多能干细胞(iPS细胞)。诱导多能干细胞在细胞形态、自我更新能、基因表达和分化能力上都与ES细胞非常类似。并且避免了ES细胞所面临的道德伦理和法律等诸多问题。iPS细胞在疾病机制研究、再生医学、组织工程和药物学等方面都有极大地应用价值。近年几年来iPS细胞的研究持续高涨，取得了许多令人瞩目的成绩，从不同的物种不同的细胞中成功获得了iPS细胞。但是目前大部分iPS细胞的诱导过程依然采用小鼠胎儿成纤维细胞（MEF细胞）作为饲养层给细胞诱导提供重编程环境，饲养层细胞在胚胎干细胞（ES细胞）及iPS细胞的传代培养中具有重要重要，但是在重编程过程中却是不必须的，动物源饲养层细胞的存在对于未来iPS细胞的临床应用具有很多不安全因素，且对于细胞重编程机制的研究也有一定的影响，c-Myc是一个原癌基因，具有潜在的致癌危险，去除c-Myc对于未来iPS细胞的临床引用具有重要作用.鉴于此，本实验试图在无饲养层的条件下借助逆转录病毒将Oct4、Klf4和Sox2三基因导入到MEF细胞中将其重编程为iPS细胞，并通过添加维生素C和逐步换液法以提高细胞重编程效率。　　 目的在无饲养层条件下建立三因子小鼠iPS细胞系的同时掌握在iPS细胞诱导这一技术，为进一步研究细胞重编程机制及未来iPS细胞的临床应用奠定基础。　　 方法(1)将pMXs-Oct4、pMXs-Sox2和pMXs-Klf4三个质粒转入到Plat-E细胞中，生产包装出含Oct4、Sox2、Klf4三个基因的病毒。　　 (2)在无饲养层的条件下用上述病毒原液一起感染MEF细胞，诱导过程中往培养基中添加维生素C及诱导初期采用逐步换液法以提高诱导效率。　　 (3)通过外形观察、定量PCR、免疫荧光染色、畸胎瘤、脏染色来检测所建立的小鼠iPS细胞系。　　 结果(1)在无饲养层条件下利用三因子成功的将MEF细胞重编程为iPS细胞，所建立的iPS细胞在外观形态、多能基因的表达、增值能力、多向分化潜能等方面与ES细胞类似。　　 (2)利用逐步换液法和添加维生素C的方法将三因子iPS细胞诱导效率提升到0.2％。