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啮齿动物螺杆菌是指寄居于啮齿动物消化道的一群螺杆菌属细菌,主要定植部位为盲肠、结肠及肝胆管系统。目前从大鼠、小鼠、沙鼠等啮齿类实验动物中已陆续分离到至少13种啮齿动物螺杆菌,其中H.hepaticus、H.bilis、H.rodentium为较为重要的感染啮齿动物的螺杆菌。啮齿动物普遍存在螺杆菌自然感染并主要以隐性感染形式存在。因此,若使用隐性携带螺杆菌的动物进行致病机理、药物筛选以及药效学等研究时,必然会干扰实验结果。啮齿动物螺杆菌的感染调查已有一些报道,目前的检测方法主要包括分离培养、免疫学检测、PCR等多种方法。本实验通过建立一种敏感、可靠的多重PCR方法对上海及周边地区的实验用兔、大鼠、小鼠、豚鼠、金黄地鼠等螺杆菌携带情况进行检测,以深入了解螺杆菌在啮齿动物上的分布情况。1. H.hepaticus、H.bilis、H.rodentium多重PCR检测方法的建立：为了更灵敏、特异、快速、高效的检测实验动物中3种螺杆菌的感染情况,本实验根据已公布的H. hepaticus、.H. bills、H. rodentium16S rRNA基因序列设计3对特异性引物,从而建立一种可同时检测H.hepaticus、H.bilis、H.rodentiun的多重PCR方法。优化后的多重PCR体系表明：3对引物能分别扩增出特异性的417bp、364bp、324bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0mM, dNTP浓度为200μM,引物浓度为0.625μM。在此条件下多重PCR同时检测的H. hepaticus、H. bilis、 H.rodentium敏感度均为10fg。由此可得,本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中H.hepaticus、H.bilis、H.rodentium奠定了良好的基础。2.上海及周边地区啮齿动物螺杆菌流行病学调查：采用单重PCR、多重PCR对上海及周边地区的啮齿动物螺杆菌感染情况进行调查。调查结果表明,上海及周边地区啮齿动物均存在不同程度的螺杆菌感染,普通级和清洁级的实验用兔螺杆菌感染率均较低,且实验用兔、豚鼠不同饲养环境,螺杆菌感染率也有明显区别。金黄地鼠、大鼠、小鼠普遍感染螺杆菌。多重PCR检测结果显示,在豚鼠和大鼠中,H. rodentium带菌率明显高于其他两种。小鼠中H.hepaticus和H.rodentium百分率略高于H.bilis,混合感染数量也较多。金黄地鼠样品数量较少,可作为参考。此外,在对大、小鼠分型统计汇总中发现,转基因小鼠螺杆菌感染率极高,接近100%,可能是因为正常基因序列被破坏而易感。